甲基对硫磷降解菌DLL-E4降解对-硝基苯酚特性

甲基对硫磷降解菌DLL-E4(Pseudomonas putida)能以对-硝基苯酚(PNP)为唯一碳源和氮源生长,还可以利用对-硝基苯酚代谢产生的亚硝酸根为唯一氮源.DLL-E4降解对-硝基苯酚的酶系是诱导产生的,甲基对硫磷(MP)和PNP驯化菌株,能有效诱导DLL-E4对PNP的降解,生长延滞期由原来的6h减少到3h,降解完全的时间由9h缩短为7h和6h.对苯二酚(HQ)诱导,降解完全的时间延长为15h.该诱导酶同时能够降解2-硝基酚.DLL-E4菌株中含有大质粒,在丢失对-硝基苯酚降解性状的突变株M+P-中依然存在.     

一株抗镉细菌的分离鉴定及其抗性基因定位的初步研究

报道了从长期重金属镉处理土壤中分离纯化 ,获得一株可在含镉 2 0 0mg L的培养基上正常生长的抗镉细菌菌株 ,编号为DKC1.经对该菌株进行形态观察、Biolog生理生化分析、G Cmol%测定及 16SrDNA序列同源性比较 ,该菌株鉴定为Ral stoniaeutropha .利用RDPⅡ数据库的PhylipInterface进行了系统发育地位分析 ,构建了进化树 ,并对KDC1菌株进行了抗重金属谱测定 ,结果表明该菌株对镉有较高的抗性 (35 0mg L)而对其它重金属耐性较低 ,通过质粒检测 ,该菌株含有一较大质粒 ,抗镉基因位于质粒上 .     

九株染料脱色菌的脱色特性及其质粒与基因分析

对9株染料脱色菌的脱色特性及其质粒的携带情况进行初步的研究，测定和比较了这9株细菌的16SrDNA序列，并对其进行分子鉴定和分类，经检测的9株细菌均属于肠杆菌科，其中脱色能力较广谱的5株细菌均未检测到质粒的存在，它们在系统分类地位上基本上聚为一类，与埃希氏菌属的大肠埃希氏菌具有较高的同源性。而另外4株脱色能力单一、仅对三苯基甲烷类染料有较强脱色能力的菌株除一株以外，其它3株均携带有大分子量的质粒，在系统分类地位上也基本聚为另一类。     

紫云英根瘤分离菌株质粒多样性的研究

从广东、广西、湖南、湖北、江西、浙江、江苏７省紫云英（ＡｓｔｒａｇａｌｕｓｓｉｎｉｃｕｓＬ．）主要分布区４６个采集点的紫云英根瘤中分离到１０１个菌株．检测发现有１６种不同质粒类型,所含质粒１～４个不等,含两个质粒的菌株占绝大部分,质粒Ｍｒ为３６×１０６～３６４×１０６．用克隆Ｍ．ｈｕａｋｕｉ７６５３Ｒ的ｎｏｄＤＢＣ４．２ｋｂ片段为探针（α３２ｐｄＣＴＰ）进行的分子杂交结果表明,所有这些菌株均含有共生质粒,通常为第一大质粒,但Ｃ、Ｌ、Ｍ、Ｎ和Ｏ型为第二大质粒,共生质粒Ｍｒ在１３１×１０６～３６４×１０６之间．比较质粒类型与１６Ｓ２３ＳｒＤＮＡＩＧＳ（ｐＨｒ,ｐ２３ＳＲ０１）ＰＣＲＲＦＬＰ分析结果表明,ＩＧＳ类型不同,即使在同一植株分离所得的根瘤其质粒类型常不同,但在同一植株上分离菌株的质粒类型相同,则其ＩＧＳ常表现相同．表明质粒的类型是细菌染色体背景和细菌外环境（如共生条件等）共同作用的结果     

重组质粒DNA在热处理过程中的降解/变性规律研究

生物实验室产生的废弃重组基因片段的排放是造成.基因污染"的途径之一.热处理是目前生物实验室处置废弃重组基因片段、核酸等物质的主要手段.以pET-28b质粒为材料,采用定量PCR技术结合电泳和质粒转化等手段分析了重组基因片段在热处理过程中的降解与失活规律,以及不同离子强度对重组质粒热降解的影响.结果显示,100℃热处理过程中质粒 pET28b 的降解随时间变化较为明显,降解半衰期约为2.7min;处理30min后仍存在具有转化活性的质粒;实验结果表明,100℃热处理后的废弃重组基因片段排入自然生态系统后仍存在基因转移的可能性.     

降解-示踪质粒的构建及性能评价研究

在生物强化中采用报告基因技术对降解质粒进行标记,可实现对基因工程菌和降解基因的原位监测。通过基因克隆技术,将绿色荧光蛋白基因(gfp)和阿特拉津脱氯水解酶基因(atzA)重组,构建降解-示踪功能质粒,实现对阿特拉津降解质粒的示踪标记,并对转化获得的基因工程菌绿色荧光蛋白表达及阿特拉津降解能力进行评价。结果表明将gfp和atzA基因克隆至质粒载体pUC18所获得的重组质粒,经检测含有atzA基因,具有氨苄青霉素抗性,并可表达绿色荧光蛋白。携带重组质粒的基因工程菌具有阿特拉津降解活性;且在活性污泥中产生绿色荧光现象,可通过原位观察进行监测。     

1,2,4-三氯苯降解菌的分离及其降解质粒的研究

 以1,2,4-三氯苯为唯一碳源,从天津化工厂氯苯生产车间的土壤中分离到1株1,2,4-三氯苯的降解菌THSL-1.通过形态观察和16SrDNA序列测定,该菌株被初步鉴定为施氏假单胞菌(Pseudomonasstutzeri).经质粒检测,在菌株THSL-1中发现1条质粒条带,将所获得质粒转化到E.coli.JM109中,转化子能以1,2,4-三氯苯为唯一碳源生长,且对1,2,4-三氯苯有降解作用.因此,可以认为该质粒携带降解1,2,4-三氯苯的基因.选用HindIII、BamHI、XholI3种限制性内切酶分别对质粒pTHSL-1进行单酶切、双酶切,最终确定质粒平均大小为40.2kb.     

Effect of excessive cadmium chloride on the plasmids of E. coli HB101 in vivo

After Escherichia coli HB101 with plasmid pWH58, pWH98, or pTBa₅ were cultered respectively in amp LB broth which contained 50 mg/L CdCl₂ constantly for 24h, these plasmids were isolated from E. coli, and the effect of excessive CdCl₂ on the E. coli HB101 and plasmid DNA was studied by surveying the growth of E. coli HB101 and plasmid, argarose gel electrophoresis and analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) of plasmids, and plasmid transformation. The results showed that 50 mg/L CdCl₂ treatment lagged the growth of E. coli HB101 for at least 4h, but after grown for 24h there were not significant differences in the growths of E. coli HB101s and the productions of plasmids between the treatment and control. These results implified that E. coli HB101 have induced adaptability to cadmium stress and excessive CdCl₂ did not inhibit the replication and amp + genes expression of plasmid DNA in vivo of E. coli significantly. 50 mg/L CdCl₂ treatment for 24 hours might cause the sequences change of plasmid DNA, but could not lead to the random breakage of plasmid DNA strands. Moreover, after 50 mg/L of CdCl₂ treatment in vivo the transformation activities of plasmid did not altered, implied excessive CdCl₂ could not affect the superhelical structure of plasmid and also not break the loop of plasmid DNA evidently.     

短芽孢杆菌（Bacillus breuis）J74降解萘和靛蓝形成的研究

芳香族化合物是用途广泛的化学制品,主要来源于煤和石油,其结构不仅稳定,而且具有很大的毒性,因此研究它们的微生物降解一直受到人们的关注.一些芳香族化合物降解菌,具有氧化吲哚形成靛蓝的能力.靛蓝是一种染料,主要是化学合成.     

质粒DNA小量提取法的改进

介绍了一种改进的小量提取质粒DNA的方法,该方法用NH4Ac和LiCl代替常规方法中苯酚和氯仿的抽提,有效去除了样品中RNA和蛋白质;用95%乙醇代替无水乙醇沉淀质粒DNA,降低了终产物中盐和多糖等杂质的含量,获得的质粒DNA质量好,产率高,能满足常规分子生物学实验的要求,如PCR、酶切、转化大肠杆菌以及植物遗传转化.图4表1参7