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TTC-脱氢酶还原法可用于藻细胞活性的测定,但藻细胞色素会对测定产生影响。实验结果显示,当4mL细胞密度为1.3×10^10个/L的藻样,在提取剂浓度大于60%时,色素在485nm处产生吸光度值迭0.35-0.52,对测定产生较大干扰。采用正已烷进行萃取,可去除部分色素干扰,能将色素产生吸光度值降到0.14-0.32。碱性物质会破坏色素,在乙醇提取剂中加入KOH或NaOH,可将色素产生吸光度值从0.14—0.32降到0.04~0.26,所加碱性物质最佳浓度为0.001M~0.01M,过高浓度会破坏TTC的还原产物三苯基甲腊(TPF)。色素去除的最佳条件是:使用含0.001M~0.01MKOH或NaOH的50%乙醇作为提取剂,提取TPF后,用正已烷进行萃取,色素所致吸光度值可从0.45降至0.04,基本将色素干扰去除。 相似文献
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TTC-脱氢酶还原法测定铜绿微囊藻活性 总被引:7,自引:1,他引:6
利用氯化三苯基四氮唑(TTC)-脱氢酶还原法定量地测定了铜绿微囊藻细胞的活性,并对影响活性测定的因素进行了分析与研究.结果显示,TTC浓度大于0.6%时会抑制酶活性,最适TTC浓度为0.2%;脱氢酶还原反应在Tris-HCI缓冲液中能正常进行,而在磷酸盐缓冲液中受到抑制,最适pH值为7.5~8.0;培养时间和培养温度对TTC脱氧酶还原反应的影响较大,最适培养时间为8~16h,最适培养温度为30~35℃;反应不需加入非离子去垢剂,吐温20和曲拉通X-100对脱氢酶反应会产生较强抑制作用.TTC还原所生成的三苯基甲 (TPF)可采用50%乙醇提取.研究显示TTC脱氢酶还原法可以很好地进行藻细胞活性定量化测定. 相似文献
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