亚硝酸钠增强SMMC-7721细胞拮抗镉细胞毒性的研究

为了研究亚硝酸钠对肝源性细胞的毒物兴奋效应和拮抗镉诱导的细胞凋亡作用,以人体肝癌细胞SMMC-7721为模型,用3.13～3200mg·L-1亚硝酸钠作用24h,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性.结果表明,细胞增殖活性表现出毒物兴奋效应.在毒物兴奋效应浓度范围内,选取最小效应浓度的亚硝酸钠(17mg·L-1)预适应细胞24h,然后再用25μmol·L-1氯化镉处理12h,细胞增殖活性结果表明,预适应的细胞能够耐受镉损害,这种细胞保护作用可以被一氧化氮清除剂抑制.流式细胞术及Hoechst33258/PI荧光双染结果表明,亚硝酸钠预适应的细胞能够耐受镉诱导的细胞凋亡.亚硝酸钠预适应的细胞再用氯化镉处理,与单纯氯化镉处理组相比,细胞内丙二醛(MDA)含量下降,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性升高.同时,免疫细胞化学结果也显示,金属硫蛋白(MT)表达升高.总体而言,亚硝酸钠在3.13～800mg·L-1浓度范围内可促进细胞增殖活性并能够耐受镉诱导的细胞凋亡.     

亚硝酸钠对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响

为了研究亚硝酸钠对人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力的影响,用0.25 mmol.L-1 亚硝酸钠孵育细胞48 h,然后收集细胞培养液上清.用人工基底膜包被的Transwell小室记录细胞侵袭能力,考马斯亮蓝及α-微管蛋白免疫荧光染色观察细胞骨架,western blot检测细胞基质金属蛋白酶（MMPs）表达.结果显示,用亚硝酸钠孵育SMMC-7721细胞48 h,穿膜细胞为211.5±17.6个,较对照组176.3±15.5个具有显著性差异（P﹤0.05）;用亚硝酸钠孵育48h细胞培养液上清加无血清培养液组细胞穿膜数为165.12±7.90个,较无血清培养液阴性对照组30.32±11个明显增多（P﹤0.05）;细胞培养液上清加含10%牛血清白蛋白（FBS）组细胞穿膜数为186.73±9.41个,较单纯含10%FBS阳性对照组细胞穿膜数170.54±9.6个也增多（P﹤0.05）. 0.25 mmol.L-1 亚硝酸钠处理细胞48 h,细胞骨架微丝聚合呈应力纤维,沿细胞纵轴延伸,使细胞胞体伸长,微管蛋白聚合;MMP-2 和MMP-9蛋白表达增加.上述结果说明,亚硝酸钠通过诱导细胞骨架重排,促进人肝癌SMMC-7721细胞侵袭能力.