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从腐烂竹子表面采集样品经初筛、复筛获得1株半纤维素高效降解菌。采用半纤维素平板水解圈法和胞外酶测定法进行菌株筛选,利用培养特征形态学生理生化特征和分子生物学方法进行菌株鉴定,并对产酶特性和酶学性质进行了研究。结果表明,该菌株初步鉴定为类芽胞杆菌属细菌,命名为Paenibacillus sp.J-16,最适碳源和氮源分别为麸皮(20 g/L)和豆粕(15 g/L),在初始pH值为6.5,装液量为50 mL,32℃条件下180 r/min培养60 h,酶活性达到192.6 U/mL。该菌株的获得为采用生物法降解半纤维素的研究与应用提供了实践依据。 相似文献
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结合某木浆厂的实际运行数据,对采用木聚糖酶辅助漂白前后的木浆质量、主要物料消耗量及产生废水的污染物指标进行了详细分析.结果表明,在工艺运行参数不变条件下,使用木聚糖酶辅助漂白能够显著提高生产纸浆质量等级,降低原木、二氧化氯和能源消耗量,减轻漂后废水的污染负荷,对于降低纸浆生产成本,保护水环境具有重要意义. 相似文献
3.
极端嗜热菌海栖热袍菌木聚糖酶B的克隆和表达 总被引:3,自引:0,他引:3
极端嗜热菌海栖热袍菌MSB8(ThermotogamaritimaMSB8)能够利用木聚糖代谢 ,并具有两个产木聚糖酶的基因 .本研究首次克隆和在大肠杆菌中表达海栖热袍菌MSB8的第 2个木聚糖酶基因即xynB基因 .以基因组DNA为模板 ,根据xynB基因的全序列设计了两对引物 ,在合适的PCR反应条件下有效地扩增出了xynB基因片段 .选用pET2 8a(+)表达载体 ,NcoI-HindⅢ酶切位点并编码了羧基端 6×His标签的阳性克隆表达成可溶且具有生物活性的蛋白质 .xynB结构基因由 10 4 4对碱基组成 ,编码 347个氨基酸 .根据已知木聚糖酶蛋白质氨基酸的同源性分析 ,XynB与T .sp.strainFjSS3-B .1的XynA的同源性最大 ,为 85 % ,与T .neapolitana的XynB同源性次之 ,为 82 % ,与其它木聚糖酶的同源性小于 4 3% .另外 ,XynB属于F/ 10族木聚糖酶 ,且含有单一功能区 .表 3图 3参 12 相似文献
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复合菌系RXS中木质纤维素降解酶类分析 总被引:1,自引:0,他引:1
复合菌系RXS能分泌多种木质纤维素降解酶,为探究这些酶在木薯渣降解中的作用,对RXS的培养时间、酶作用的温度和pH值,以及添加金属离子对酶活性和降解效果的影响进行了研究。结果表明,在培养48 h后,木聚糖酶(Xylanase)、滤纸酶(FPAase)和内切葡聚糖酶(CMCase)酶活性均达到最大值(分别为56.02 U/m L、3.14U/m L和6.78 U/m L),pH=6.0(FPAase和Xylanase的最适pH值)、温度为55℃(FPAase和CMCase酶活性最高)条件下,RXS酶液处理可使木薯渣的失重率达到18.78%,纤维素和半纤维素质量分数分别由31.46%和20.19%下降到22.12%和12.23%。添加Cu~(2+)有效地抑制了酶液中FPAase和Xylanase的酶活性,木薯渣几乎不降解,纤维素和半纤维素组分质量分数基本不发生变化;分别添加Co~(2+)和Zn~(2+)时,对3种酶均有一定程度的抑制,木薯渣失重率仅为3.29%和4.70%;分别添加Fe~(2+)、Mg~(2+)时,FPAase酶活性被抑制,Xylanase与CMCase共同降解底物,木薯渣失重率分别达12.77%和15.81%,纤维素和半纤维素质量分数明显降低。研究表明,Xylanase与CMCase是复合菌系中降解木薯渣的关键酶,其协同作用可使木薯渣有效降解。 相似文献
5.
利用透明圈法筛选到一株产木聚糖酶的嗜碱芽孢杆菌NT 9,该菌株产木聚糖酶为组成型。正交设计实验结果表明 ,合适的产酶条件为 :木糖 15 .0g/L ,硫酸铵 2 .5 g/L ,Tween 80 2 0 g/L ,K2 HPO4 1.0g/L ,MgSO4 ·7H2 O 0 .2g/L ,pH值 10 .0 ,3 7℃ ,2 0 0r/min ,振荡培养 72h。其木聚糖酶活力可达到 6.3 6IU/mL。 相似文献
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短小芽孢杆菌A—30耐碱性木聚糖酶基因的分子生物学研究 总被引:5,自引:0,他引:5
采用PCR方法对短小芽孢杆菌A-30菌株的耐碱性木聚糖酶基因进行克隆。在木聚糖选择平板上用刚果红染色法筛选出阳性克隆,提取阳性克隆的重组质粒进行酶切鉴定和测序。该基因在大肠杆菌中表达,过夜培养物胞外、胞内和周质空间的木聚糖酶酶活分别为0.159IUmL^-1、0.322IUmL^-1和0.007IUmL^-1。此木聚糖酶表现出较宽的pH作用范围,最适作用pH7左右,在pH9时仍有60%以上的酶活性。图4参14 相似文献
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从黑曲霉(Aspergillus niger)nl-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体肠杆菌Top10 F’、DH10B和两种BL21宿主中获得重组菌株.通过IPTG诱导,xynB基因在重组菌株中获得特异性表达.表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在.诱导4 h,重组菌株pTrc-99a-xynB[BL21 condon plus(DE3)]表达量最高,胞内酶活达到299 IU/L.重组质粒pTrc-99a-xyn B(S)在不同宿主胞内和胞外均能分泌目的蛋白,诱导10 h,胞外酶活pTrc-99a-xynB(S)[BL21 condon plus(DE3)]达到347 IU/L.而pET-20b-xynB(S)在两种BL21宿主中均不表达.经SDS-PAGE分析,以pTrc-99a和pET-20b作为表达载体时,重组蛋白相对分子质量分别约为45×103和30×103.与pET-20b相比,pTrc-99a以及自身信号肽的引导更有利于重组木聚糖酶的表达. 相似文献
8.
高比活木聚糖酶的高效表达是进一步提高木聚糖酶发酵效价、降低生产成本的有效途径.将黑曲霉木聚糖酶基因XynB(不含信号肽)克隆到分泌型表达载体pPIC9K上,线性化后电击转化巴斯德毕赤酵母GS115,G418和PCR鉴定的阳性转化子经0.5%甲醇、在28℃诱导表达.SDS-PAGE分析表明,该蛋白相对分子质量为20×103左右.优化的诱导表达条件为,每隔12 h添加0.5%的甲醇,发酵5 d后,比活达4 757 U/mg;其最适温度为55℃,最适pH为5.0,80℃处理30min后仍有74%的残余酶活. 相似文献
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碱性β-聚糖酶产生菌选育及产酶条件优化 总被引:4,自引:0,他引:4
从碱性土样中分离到数十株产碱性β聚糖酶类的细菌,经摇瓶反复筛选后,得到一株碱性β聚糖酶产量较高的耐碱性细菌.经初步鉴定,属短小芽孢杆菌(Baciluspumilus).其纤维素酶作用的最适pH为7.6,最适θ为60℃,木聚糖酶的作用最适pH为9.0,最适θ为55℃.该菌的最适生长pH为8.0,最适产酶θ为28~32℃.木聚糖与山梨糖分别是木聚糖酶和纤维素酶的良好诱导物.以麸皮为碳源,产酶的最适浓度为5%.添加尿素和(NH4)2SO4为氮源可提高纤维素酶酶活2倍,木聚糖酶酶活1倍.发酵周期为60h,纤维素酶酶活最高可达1.21IUmL-1,木聚糖酶酶活可达43IUmL-1. 相似文献
10.
假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
应用多种化学修饰剂对假单孢菌G6-2产生的碱性木聚糖酶A(XynA)进行了修饰。结果表明,作用于色氨酸和谷氨酸(和/或天冬氨酸(的试剂NBS(N-Bromosuccinimide)和WRK(N-Ethyl-5-phenylisoxazolium-3-sulfonate)可分别使酶活明显降低,百作用与丝氨酸,精氨酸,酪氨酸的试剂对酶活无明显影响。XynA的化学修饰动力学分析表明,每个酶分子中有1个色氨酸残基和1个谷氨酸(或天冬氨酸)残基对酶的活性特别重要。NBS的滴定结果表明,木聚糖的加入使可使1个色氨酸残基被保护,木聚糖对NBS的荧光猝来有22%的保护作用。0.2%的燕麦木聚糖可可阻止NBS树XynA的修饰作用;而即使2%的木聚糖也不能阻止WRK的灭活作用,NBS可使XynA的Km增大4倍,而RK可使其Vmax降低三分之二。这些结果表明,色氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸(残基位于XynA的活性部位,且前者位于XynA的底物结合中心,后者位于酶的催化中心;图6表1参14 相似文献