发根农杆菌转化海边香豌豆及转化体的体细胞胚胎发生

将海边香豌豆无功苗的子叶和下胚轴切段在附加ρ（2,4-D)=1mgL^-1,ρ（6BA)=0.5mgL^-1的MS培养基上预培养3d，然后与发根农杆菌A4菌液共培养30min。洗涤之后，在附加羧苄青霉素的无激素的MS培养基上培养。7－10d后，外植体切面处长出许多毛状根。继代培养时生长旺盛，且产生许多侧根和分枝。志状根的诱导频率与无菌苗培养天数和外植体来源部位有关。子叶切块的诱导率明显高于下胚轴，16d龄无菌苗的子叶切块诱导毛状根的频率最高。乙酰丁香酮处理菌液可以有效提高子叶外植体的毛状根诱导频率。将毛状根切段培养在含有ρ（2，4－D）＝1.0mgL^-1的MS培养基上可诱导出愈伤组织。该种愈伤组织转移到含有ρ（2，4－D）＝0.3mgL^-1的MS培养基上培养时，诱导出了许多早期体细胞胚。检测的转化组织均含有农杆碱和甘露醇。图2表1参19     

龙眼胚性愈伤组织Cu/Zn-SOD分子伴侣基因CCS的克隆及其在体胚发生过程中的表达分析

为了解Cu/Zn超氧化物歧化酶分子伴侣基因(CCS)在龙眼体胚发生过程中的表达调控机制,以龙眼松散型胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR法,克隆了长960 bp含有完整开放阅读框的龙眼DlCCS核酸序列,其编码一个含有319个氨基酸的蛋白质(GenBank登录号:FJ973472).生物信息学分析显示:该蛋白为亲水的、稳定的、含有跨膜结构域的酸性蛋白质,定位于叶绿体;与毛果杨、葡萄、拟南芥、水稻和锦鸡儿具有较高同源性,含有植物CCS蛋白所特有的3个保守结构域;预测其通过不同的磷酸化方式,改变酶活性及蛋白构象,参与龙眼体胚中超氧化物代谢以及金属离子转运等生物学过程,在氧化还原过程中发挥作用.利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术研究该基因在龙眼体胚发生发育过程中的表达情况,结果显示,从松散型胚性愈伤组织(Stage 1)到胚性紧实球形结构阶段(Stage 4),DlCCSmRNA的转录水平较低且波动小;当胚性紧实球形结构进一步发育到子叶形胚阶段(Stage 8),其表达量迅速增加,在成熟胚阶段(Stage 9)达到最高峰,提示DlCCS可能在龙眼体胚的中晚期起主要作用     

火炬松成熟合子胚培养直接体细胞胚胎发生和植株再生

以Hb、Ma和Mc3个基因型的火炬松成熟合子胚为外植体,建立了火炬松的离体培养直接体细胞胚胎发生植株再生体系实验结果表明,不同基因型火炬松之间的直接体细胞胚诱导频率有明显差异3个基因型中．Hb的成熟合子胚在附加1mg·L－12,4－D和4mg·L－1BA的DCR培养基上的直接体细胞胚诱导频率最高,达18％,扫描电镜观察表明,直接体细胞胚主要形成于成熟合子胚的子叶表而且胚轴较短,和母体组织仅保持胚根部位的联系组织细胞学切片结果表明,直接体细胞胚上胚根的发育落后于子叶,但是由直接体细胞胚发育形成的再生小苗有独立的维管组织,根部也较发达,并且整个小植株的维管系统和成熟合子胚上子叶的维管组织没有直接的联系.     

龙眼miR167家族分子特性及其潜在靶标在体胚发生早期的表达模式

为了解miR167家族成员的分子特性及其可能互作的靶标在龙眼体胚发生早期的调控机制,采用生物信息学分析方法进行龙眼miR167基因家族序列分析、二级结构预测、分子进化树分析、靶基因预测及其靶标特异表达的FPKM值分析,并采用实时荧光定量PCR技术(quantitave real-time PCR,qPCR)检测miR1...     

龙眼胚性细胞悬浮培养再生植株

以龙眼胚性愈伤组织为起始材料 ,研究了胚性悬浮细胞培养的影响因素、继代保持方法及其体胚发生与植株再生 .结果表明 ,建立龙眼优良胚性悬浮细胞系的技术关键在于 :由松散型胚性愈伤组织作为起始材料 ;以去除琼脂的保持松散型胚性愈伤组织的培养基作为启动培养基 ;采用分别附加 5mgL-1AgNO3 、10 0mgL-1肌醇的培养基交替继代保持 .胚性悬浮细胞在附加 2 %蔗糖、0 .7%琼脂、4 0 0mgL-1LH、10 0mgL-1肌醇的MS固体培养基上形成的体胚数量可达 7× 10 4～ 14× 10 4g-1.经过成熟培养后 ,体胚转换植株的频率在 6 5 %以上 .图版 1图 1表 3参 16     

Developmental Disturbances in the Progeny of Sea Urchins as an Index of Environmental Pollution

The development of the progeny of Strongylocentrotus intermedius sea urchins collected in September 1999 at six stations of Peter the Great Bay (the Sea of Japan) was studied. No significant differences between the samples in the number of anomalies were observed at the earliest stages of embryogenesis (fertilization and the first cleavage division). The greatest deviation from normal development was observed in the progeny of sea urchins from station 1. The relationship between disturbances in the reproductive function of sea urchins and the level of heavy metal pollution of the Amur Bay ecosystem, as well as the usefulness of various indices characterizing the quality of the sea urchin progeny from the bioindication standpoint are discussed.     

龙眼胚性愈伤组织维生素C过氧化物酶基因(apx)及NADH脱氢酶基因(nad2)部分序列的克隆

采用PCR技术从龙眼胚性愈伤组织中扩增出维生素C过氧化物酶基因 (apx)的部分cDNA序列longan1及NADH脱氢酶基因(nad2)的部分cDNA序列longan31,其中longan31是首次从体胚中克隆到的NADH脱氢酶基因(nad2).杂交结果显示,longan1与胚性愈伤组织和球形胚的RNA具有明显杂交信号,说明longan1在胚性愈伤组织和球形胚阶段特异表达. 图 3参 19     

苏云金芽孢杆菌BtZ01对小鼠胚胎和胚后发育的影响

为了探讨苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)Bt Z01对小鼠胚胎发育和胚后生长发育的影响,将48只孕鼠随机分组,试验组饲喂浓度分别为106CFU·m L-1、108CFU·m L-1、5×109CFU·m L-1的Bt Z01菌液,并设灭菌水为对照组。采用行为致畸学方法检查Bt Z01对小鼠胚胎和胚后发育的影响并制作脏器切片,测量脏器指数等指标。结果表明,与对照组相比,各试验组小鼠在胚胎和胚后发育各阶段体重和体长无显著差异(P0.05),胚胎畸形发生率无增加,骨骼染色观察发现高剂量组小鼠后囟门显著大于其他3组(P0.05)。18 d与48 d小鼠部分脏器指数存在显著差异,但病理切片观察发现仅高剂量组肾脏有病变发生。试验结果表明,苏云金芽孢杆菌Bt Z01在浓度为108CFU·m L-1及以下时对小鼠胚胎发育及胚后生长发育无不良影响。