| 地衣芽孢杆菌γ-谷氨酰转移酶的分离和纯化 |
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| 引用本文： | 杨革,刘艳,李桂芝.地衣芽孢杆菌γ-谷氨酰转移酶的分离和纯化[J].应用与环境生物学报,2008,14(3):432-435. |
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| 作者姓名： | 杨革 刘艳 李桂芝 |
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| 作者单位： | 山东曲阜师范大学生命科学学院,山东,曲阜,273165 |
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| 基金项目： | 山东省教育厅资助项目
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山东省优秀中青年科学家科研奖励基金
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曲阜师范大学校科研和校改项目 |
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| 摘 要： | γ-谷氨酰转移酶(GTE)是聚γ-谷氨酸生物合成的关键酶,地衣芽孢杆菌QBL-033是目前合成聚γ-谷氨酸的主要菌种,其γ-谷氨酰转移酶的研究尚未见报道.分离纯化该菌中的γ-谷氨酰转移酶,研究其辅酶组成,对揭示γ-谷氨酰转移酶的分子结构和性质,提高聚γ-谷氨酸产率很有必要.将培养至对数期中期的细胞离心收集并用缓冲液洗涤,细胞破碎、离心去除菌体碎片得无细胞抽提液.经DEAE-纤维素柱(HIC)、G-200凝胶过滤柱层析得到纯化大约70倍的以NADPH为辅酶的GTE和部分纯化的以NADH为辅酶的GTE,这两个酶分别对NADPH、NADH高度专一.经HPLC和SDS-PAGE测得前一种酶的分子量和亚基相对分子质量分别为235×103和39×103,表明该酶为具有相同亚基的六聚体.酶活性测定使用HLTACHI U-3000分光光度计利用NAD(P)H在340nm氧化的初速度进行.纯化结果表明,QBL-033中确实存在两种GTE.QBL-033是以NADPH为辅酶的GTE参与聚γ-谷氨酸的合成代谢,以NADH为辅酶的GTE参与聚γ-谷氨酸的分解代谢.同时发现以NADPH为辅酶的GTE在280 nm吸收很弱,在215 nm吸收很强,说明此酶中酪氨酸、苯丙氨酸含量较低.GTE最适作用温度和最适反应pH值分别为50 ℃和6.0,具有较宽的pH稳定性,并且在50℃以下较稳定.Ca2 、Co2 、Cu2 、Mn2 、Pb2 、K2 、Zn2 ,以及EDTA对酶有不同程度的抑制作用,Fe2 和Mg2 对酶有轻微的激活作用.图4表1参16
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| 关 键 词： | γ-谷氨酰转移酶 地衣芽孢杆菌 纯化 酶学性质 地衣芽孢杆菌 谷氨酰 转移酶 分离和纯化 Characterization Purification 激活作用 抑制作用 程度 EDTA 稳定性 最适反应 最适作用温度 酸含量 苯丙 酪氨酸 吸收 发现 分解代谢 合成代谢 |
| 修稿时间： | 2007年3月8日 |
Purification and Characterization of γ-Glutamyl Transferase from Bacillus licheniformis QBL-033 |
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| YANG Ge,LIU Yan,LI Guizhi.Purification and Characterization of γ-Glutamyl Transferase from Bacillus licheniformis QBL-033[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2008,14(3):432-435. |
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| Authors: | YANG Ge LIU Yan LI Guizhi |
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