| 具有LXRα活性效应物质的新型筛查方法研究 |
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| 作者姓名： | 汤卓衡 高俊敏 贾映亭 胡文欣 胡建英 |
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| 作者单位： | 1. 重庆大学三峡库区生态环境教育部重点实验室, 重庆 400045;2. 北京大学城市与环境学院, 地表过程分析与模拟教育部重点实验室, 北京 100871 |
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| 基金项目： | 政府间国际科技创新合作重点专项（2016YFE0117800）；国家自然科学基金资助项目（21976021）；国家重点研发计划（2019YFD1100504） |
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| 摘 要： | 为了检测环境中潜在的LXRα效应物质.本研究以LXRα蛋白为例，利用核受体蛋白与小分子亲和结合的原理，构建了pCold-TF-LXRα重组蛋白并优化了重组蛋白的表达条件，建立了特异性捕获活性物质的方法.结果表明：诱导温度为20℃、诱导剂IPTG浓度为0.4mmol/L为重组蛋白的最佳表达条件；同时，利用LXRα激动剂T0901317 4个梯度浓度（0.25，2.5，25，250μg/L）的加标回收率实验测得线性回归曲线为y =0.83604x+0.40763，R2=0.9948，证明方法具有有效性；对比pCold-TF空载体蛋白（6.42%）和重组蛋白（79.83%）对T0901317（250 μg/L）的回收率，说明方法具有特异性.为了验证方法的实用性，将重组蛋白与15种典型的有机磷酸酯类化合物（OPEs）的混合标样进行“捕获”实验，证明了TPHP、BPADP、TCrP、EHDPP、TNBP、RDP、TEHP、TDCIPP具有LXRα的活性效应.最后，用酵母双杂交实验验证了这8种OPEs均为LXRα的拮抗剂.
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| 关 键 词： | 肝X受体 重组蛋白 有机磷酸酯 酵母双杂交系统 |
| 收稿时间： | 2019-12-03 |
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