| 朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析 |
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| 引用本文： | 彭博,卜春亚,师光禄,李金玲,冯晓姣,韩晶玉,高品,王有年.朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的原核表达及其活性分析[J].应用与环境生物学报,2015(2):215-220. |
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| 作者姓名： | 彭博 卜春亚 师光禄 李金玲 冯晓姣 韩晶玉 高品 王有年 |
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| 作者单位： | 北京农学院植物科学技术学院;北京农学院农业部都市农业(北方)重点开放实验室;北京农学院生物科学与工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31200483);北京市自然科学基金项目(6122005);教育部科学技术重点研究项目(212001);北京市教育委员会科技计划面上项目(KM201210020001);北京市教育委员会平台项目(KCT2014001)资助~~ |
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| 摘 要： | 乙酰胆碱酯酶(ACh E)在神经信号传导过程中起重要作用,是氨基甲酸酯类和有机磷类农药的主要作用靶标.对朱砂叶螨ACh E进行体外表达和纯化,并分析其活性.将朱砂叶螨ace基因序列插入到原核高效表达载体p ET-30a中,构建表达载体p ET-30a/ace,转入表达菌株Escherichia coli BL21(DE3)中,IPTG诱导高效表达;镍柱纯化目的蛋白,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白;以纯化的螨ACh E为抗原制备抗螨ACh E特异性抗体;改良的Ellman法测定螨ACh E活性.结果获得了相对分子质量(Mr)约为68×103的较高纯度的螨ACh E蛋白,检测大部分为可溶性表达,酶活检测具有乙酰胆碱酯酶活性,并制备了107效价的抗螨ACh E特异性抗体.采用重组ACh E(IC50=5.4 mmol/L)检测毒扁豆碱抑制活性比螨粗酶液(IC50=58.7 mmol/L)灵敏度提高11倍.本研究构建了螨ACh E体外高效表达载体并获得了具有较好活性的重组螨ACh E,可为抗ACh E杀螨剂的体外高通量筛选和以ACh E为靶标的农药残留检测奠定基础.
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| 关 键 词： | 朱砂叶螨 乙酰胆碱酯酶 原核表达 纯化 半数抑制浓度 |
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