| 利用甘油脱水酶基因构建产3-羟基丙醛工程菌及其表达比较 |
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| 引用本文： | 杜好勉,诸葛斌,方慧英,张成,宗红,诸葛健.利用甘油脱水酶基因构建产3-羟基丙醛工程菌及其表达比较[J].应用与环境生物学报,2013(1):20-24. |
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| 作者姓名： | 杜好勉 诸葛斌 方慧英 张成 宗红 诸葛健 |
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| 作者单位： | 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;江南大学生物工程学院工业微生物研究中心;江南大学食品科学与技术国家重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(“863”计划,20 06A A020103,20 09A A02Z210)资助~~ |
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| 摘 要： | 3-羟基丙醛(3-HPA)是一种重要的化工产品,可由甘油经甘油脱水酶作用后生成.为获得产3-HPA基因工程菌,在已构建含甘油脱水酶基因及其激活因子大亚基质粒pEtac-dhaB-gdrA的基础上,构建了包含小亚基gdrB激活因子的重组质粒pEtac-dhaB-gdrA-gdrB.利用大肠杆菌通用tac启动子将该质粒在不同Escherichia coli BL21、DH5a及JM109中进行表达.阳性转化子经IPTG诱导后,提取总RNA,以cDNA为模板进行RT-PCR发现,目标基因在不同宿主都能较好转录.SDS-PAGE、酶活测定和3-HPA浓度测定结果表明,目标蛋白表达存在差异;酶活分别为4.7(±0.44)、3.5(±0.95)、8.1(±0.66)U/mg;发酵液中3-HPA的含量分别为0.012(±0.0044)、0.014(±0.003)、0.375(±0.018)g L-1,重组E.coli JM109/pEtac-dhaB-gdrA-gdrB具有较好的甘油脱水酶基因表达和产3-HPA性能.该基因工程菌与克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)相比,发酵副产物明显较少,有利于后期提取,为生产3-HPA提供了一条新思路.
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| 关 键 词： | 甘油脱水酶 3-羟基丙醛 大肠杆菌 tac启动子 发酵 |
Construction of Recombinant Strains for 3-hydroxypropionaldehyde Biosynthesis and Comparison of Glycerol Dehydratase Gene Expression in Hosts |
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| DU Haomian,ZHUGE Bin,FANG Huiying,ZHANG Cheng,ZONG Hong,& ZHUGE Jian.Construction of Recombinant Strains for 3-hydroxypropionaldehyde Biosynthesis and Comparison of Glycerol Dehydratase Gene Expression in Hosts[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2013(1):20-24. |
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| Authors: | DU Haomian ZHUGE Bin FANG Huiying ZHANG Cheng ZONG Hong & ZHUGE Jian |
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| Institution: | 1,2,3(1Key Laboratory of Industrial Biotechnology,Ministry of Education,Jiangnan University,Wuxi 214122,Jiansu,China)(2State Key Laboratory of Food Science and Technology of China,Jiangnan University,Wuxi 214122,Jiansu,China)(3Research Center of Industrial Microorganisms,School of Biotechnology,Jiangnan University,Wuxi 214122,Jiansu,China) |
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