| 木聚糖酶基因xynB在不同大肠杆菌表达系统中的表达比较 |
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| 引用本文： | 李飞,李迅,孙静,王飞,赵林果. 木聚糖酶基因xynB在不同大肠杆菌表达系统中的表达比较[J]. 应用与环境生物学报, 2011, 0(1): 100-103 |
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| 作者姓名： | 李飞 李迅 孙静 王飞 赵林果 |
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| 作者单位： | 南京林业大学化学工程学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.30871990); 江苏省自然科学基金项目(No.BK2008423)资助~~ |
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| 摘 要： | 从黑曲霉(Aspergillus niger)nl-1中克隆获得木聚糖酶基因xynB.该基因全长745 bp,含有67 bp内含子,与公布的黑曲霉xynB基因有较高的同源性.将PCR扩增的木聚糖酶成熟肽基因和含有信号肽的基因分别连接到表达载体肠杆菌Top10 F’、DH10B和两种BL21宿主中获得重组菌株.通过IPTG诱导,xynB基因在重组菌株中获得特异性表达.表达产物以胞内可溶性蛋白和不溶性包涵体形式存在.诱导4 h,重组菌株pTrc-99a-xynB[BL21 condon plus(DE3)]表达量最高,胞内酶活达到299 IU/L.重组质粒pTrc-99a-xyn B(S)在不同宿主胞内和胞外均能分泌目的蛋白,诱导10 h,胞外酶活pTrc-99a-xynB(S)[BL21 condon plus(DE3)]达到347 IU/L.而pET-20b-xynB(S)在两种BL21宿主中均不表达.经SDS-PAGE分析,以pTrc-99a和pET-20b作为表达载体时,重组蛋白相对分子质量分别约为45×103和30×103.与pET-20b相比,pTrc-99a以及自身信号肽的引导更有利于重组木聚糖酶的表达.
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| 关 键 词： | 木聚糖酶 xynB基因 大肠杆菌 重组表达 信号肽 黑曲霉 |
Expression of Xylanase Gene xynB in Escherichia coli |
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| LI Fei,LI Xun,SUN Jing,WANG Fei , ZHAO Linguo. Expression of Xylanase Gene xynB in Escherichia coli[J]. Chinese Journal of Applied and Environmental Biology, 2011, 0(1): 100-103 |
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| Authors: | LI Fei LI Xun SUN Jing WANG Fei & ZHAO Linguo |
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| Affiliation: | LI Fei,LI Xun,SUN Jing,WANG Fei & ZHAO Linguo(College of Chemical Engineering,Nanjing Forestry University,Nanjing 210037,China) |
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| Abstract: | The xynB gene of endo-1,4-xylanase was cloned from Aspergillus niger.The full-length gene contained 745 bp,including an intron of 67 bp,which has high similarity with other xylanase genes.The xynB cDNA fragment encoding mature peptide and the xynB cDNA were inserted into the expression vectors pTrc-99a and pET-20b,respectively.Then the recombinant plasmids were transformed into Escherichia coli TOP10F,DH10B and two kinds of BL21,respectively.The xynB gene was expressed in the recombinant stains by inducing ... |
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| Keywords: | xylanase xynB gene Escherichia coli recombinant expression signal peptide Aspergillus niger |
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