泡盛曲霉产菊粉酶的分离纯化和酶学性质

利用(NH4)2SO4分级沉降、透析袋、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephadex凝胶层析和SDS-PAGE电泳分析对泡盛曲霉(Aspergillus awamori)分泌的菊粉酶粗酶液进行分离纯化,探究了菊粉酶的酶学性质,得到菊粉酶Ⅰ、菊粉酶Ⅱ、菊粉酶Ⅲ。菊粉酶的Ⅰ纯化倍数为10.81倍,酶比活力为261.13U/mg;菊粉酶Ⅱ的纯化倍数为14.19倍,酶比活力为400.72U/mg;菊粉酶Ⅲ的纯化倍数为13.92倍,酶比活力为392.99U/mg,表明泡盛曲霉产胞外菊粉酶具有三种同工酶成分。纯化的菊粉酶经SDS-PAGE检测,显示为单一条带。经测定该酶主要表现外切菊粉酶活力,最适温度为60℃,在20—60℃范围内具有良好的温度耐受性,最适p H为5.0,p H5.0—7.0之间具有较稳定的酸碱耐受性。以菊粉为底物,测得动力学常数Km=12.80mmol/m L、Vmax=31.87mg/(m L/min)。