| 石油烃厌氧降解关键基因masD和bamA的实时荧光定量PCR检测方法与应用 |
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| 作者姓名： | 易宁 吴蔓莉 段旭红 刘泽梁 张俞 张旭红 |
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| 作者单位： | 陕西省环境工程重点实验室,西北水资源与环境生态教育部重点实验室,西安建筑科技大学环境与市政工程学院,西安,710055 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(52070154,21577109)资助~~; |
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| 摘 要： | masD和bamA是控制石油烃厌氧降解的关键基因,利用实时荧光定量PCR技术检测masD和bamA基因具有简便快速和易操作等优点.但目前所用方法存在扩增效率低,方法灵敏度较差的问题.本文根据引物设计原则,利用Allele ID6软件重新设计了扩增masD和bamA的实时荧光定量PCR引物,将质粒DNA进行8次10倍梯度稀释后构建实时荧光定量PCR标准曲线.优化后的体系（20μL）为：FastStart Essential DNA Green Master 10.0μL,上下游引物各0.4μL,RNase-Free Water 4.2μL,5.0μL DNA模板.利用新设计的引物扩增masD和bamA基因的最适退火温度分别为61℃和57℃.优化后的检测方法扩增效率提高至97.5%和71.2%,比文献报道的方法提高了7.6%—44.5%,具有更高的重复性和灵敏度.利用设计的引物对陕北5个地区石油污染土壤中的masD和bamA基因进行定量检测结果表明,石油污染土壤中普遍存在着控制石油烃厌氧降解的关键基因,所测定的土壤中bamA降解基因的拷贝数远高于masD降解基因.
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| 关 键 词： | 实时荧光定量聚合酶链式反应 厌氧降解基因 引物设计 masD基因 bamA基因 扩增效率 石油污染土壤 |
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