| 用于环境污染物遗传毒性评价的重组发光细菌载体的构建 |
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| 引用本文： | 黄新新,何苗,施汉昌,蔡强.用于环境污染物遗传毒性评价的重组发光细菌载体的构建[J].环境科学,2008,29(11):3159-3165. |
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| 作者姓名： | 黄新新 何苗 施汉昌 蔡强 |
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| 作者单位： | 清华大学环境科学与工程系水环境保护研究所，北京100084;清华大学环境科学与工程系水环境保护研究所，北京100084;清华大学环境科学与工程系水环境保护研究所，北京100084;清华大学环境科学与工程系水环境保护研究所，北京100084 |
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| 基金项目： | “十一五”国家科技支撑计划重点项目（2006BAC19B06）；浙江省重大科技专项社会发展项目（2007C13010） |
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| 摘 要： | 基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用，本研究从污染物遗传毒性损伤的机制出发，构建2种遗传毒性新型基因重组发光菌载体PUCD-uvrA、PUCD-alkA.用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增uvrA、alkA基因，将其与pGEM-T easy载体连接后测序.测序正确的uvrA、alkA片段及PUCD615载体均用BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切，连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆，提取质粒用PCR鉴定，阳性克隆再进行测序.结果表明，uvrA、alkA基因PCR扩增出的片段为237 bp、326 bp，测序结果与GenBank中uvrA、alkA序列进行BLAST比对，同源性均为99％，表明扩增序列正确.与PUCD615载体连接后的测序结果表明，uvrA、alkA基因已正确地插入到PUCD615的多克隆位点，方向和读码框正确，2种载体构建成功.通过优化连接及转化条件，可将大片段的PUCD615载体与短片段的插入序列连接成功，构成重组载体.
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| 关 键 词： | 重组发光菌 遗传毒性 PUCD-uvrA、PUCD-alkA载体 |
| 收稿时间： | 2007/11/27 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2008/3/15 0:00:00 |
Construction of Recombinate Luminescence Bacteria Vector to Evaluate the Genetoxic of Environment Pollutant |
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| HUANG Xin-xin,HE Miao,SHI Han-chang and CAI Qiang.Construction of Recombinate Luminescence Bacteria Vector to Evaluate the Genetoxic of Environment Pollutant[J].Chinese Journal of Environmental Science,2008,29(11):3159-3165. |
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| Authors: | HUANG Xin-xin HE Miao SHI Han-chang and CAI Qiang |
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