| 顺丁烯二酸异构酶工程菌发酵条件优化 |
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| 引用本文： | 刘祥涛,赵青,任杰,李正华,王昌禄,吴洽庆,朱敦明.顺丁烯二酸异构酶工程菌发酵条件优化[J].应用与环境生物学报,2011(4):558-562. |
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| 作者姓名： | 刘祥涛 赵青 任杰 李正华 王昌禄 吴洽庆 朱敦明 |
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| 作者单位： | 天津科技大学食品工程与生物技术学院食品营养与安全教育部重点实验室;中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室; |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程重要方向性项目(Nos.KSCX2-YWG-031,KSCX2-YWG-048)~~ |
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| 摘 要： | 为提高重组大肠杆菌中顺丁烯二酸异构酶表达量,通过正交试验设计,对工程菌的生长条件和目的蛋白可溶表达条件进行优化.采用250 mL三角瓶中装有50 mL(Amp 100 mg L-1)的培养基,分别研究培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母浸粉的浓度,培养基pH值以及摇床转速、装液量、接种量等对蛋白可溶表达量的影响.确定顺丁烯二酸异构酶工程菌最优化培养基为:蛋白胨20 g L-1、酵母浸粉2.5 g L-1、K2HPO4·3H2O 3.0 g L-1、KH2PO4 1.5 g L-1、NaCl 6 g L-1、MgSO43 g L-1,培养基pH调至6.5.确定顺丁烯二酸异构酶工程菌可溶性表达最优条件为:37℃下培养至D600 nm值为1.0时,添加终浓度为0.05 mmol L-1的IPTG进行诱导,诱导温度37℃,摇床转速220 r min-1,装液量20%,接种量5%,诱导时长为6 h.利用BioFlo 415发酵罐以最优化的培养基和发酵条件对该工程菌进行了3批发酵实验,与摇瓶实验相比,顺丁烯二酸异构酶的表达量提高了近1.5倍,单位发酵液的酶活力由46 U mL-1发酵液提高到78 U mL-1发酵液.以上数据为顺丁烯二酸异构酶重组工程菌的中试发酵奠定了基础.图7表2参17
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| 关 键 词： | 顺丁烯二酸异构酶 发酵条件优化 重组工程菌 正交试验设计 酶活力 |
Optimization of Fermentation Conditions of Escherichia coli Strain Expressing a Recombinant Maleate cis-trans Isomerase |
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| LIU Xiangtao,ZHAO Qing,REN Jie,LI Zhenghua,WANG Changlu,WU Qiaqing & ZHU Dunming.Optimization of Fermentation Conditions of Escherichia coli Strain Expressing a Recombinant Maleate cis-trans Isomerase[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2011(4):558-562. |
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| Authors: | LIU Xiangtao ZHAO Qing REN Jie LI Zhenghua WANG Changlu WU Qiaqing & ZHU Dunming |
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| Institution: | LIU Xiangtao1,2,ZHAO Qing2,REN Jie2,LI Zhenghua2,WANG Changlu1,WU Qiaqing2 & ZHU Dunming2(1Key Laboratory of Ministry of Education for Food Nutrition and Safety,Tianjin University of Science&Technology,Tianjin 300457,China)(2 National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes,Tianjin Institute of Industrial Biotechnology,Chinese Academy of Sciences,Tianjin 300308,China) |
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| Abstract: | The fermentation conditions of the Escherichia coli strain pET32a-Mtil-BL(DE3) 21] expressing a recombinant maleate cis-trans isomerase were optimized by orthogonal experiment design.The effects of the components of the culture medium(tryptone,yeast extract and pH),shaking speed,medium volume and inoculum concentration on cell growth and expression of maleate cis-trans isomerase were studied in 250 mL erlenmeyer flask containing 50 mL medium.The optimum medium composition was as follows: Tryptone 20 g L-1,... |
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| Keywords: | maleate cis-trans isomerase optimization of fermentation condition recombinant bacterium orthogonal experiment design enzyme activity |
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