2—硝基芴DNA加合物的研究

２－硝基芴直接与小牛胸腺ＤＮＡ反应，用＾３２Ｐ后标记方法能够测定了出有多种ＤＮＡ加合物生成，将定量的２－硝基芴一次注射入大鼠和经过Ａｒｏｃｌｏｒ诱导的大鼠腹腔内，２４ｈ后取其肝，肾，肺，脾，血等诸器官，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法测定各组织中的ＤＮＡ加合物。     

^32P后标记方法测DNA加合物

用~(32)P后标记的方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应的加合物,是将小牛胸腺DNA和环氧苯乙烯仿照体内条件进行体外反应,反应产物在核酸内切酶及外切酶的存在下,水解成2’-脱氧核糖核苷3’-单磷酸(dNmP).这种水解后的3’-单磷酸在T_4多核激酶的存在下,使γ~(32)P ATP上的放射磷与核苷的磷进行交换反应,生成2’-脱氧核苷-3’,5’-二磷酸(dNDP).被标记的3’,5’-二磷酸及加合物,通过ODS薄层色谱板及PEI纤维阴离子交换色谱板进行适当的分离分辨分析,使DNA加合物从正常的核酸分子中分离出来.用自显影加上空白对照确定加合物的指纹图,最后用液体闪烁计数要定量分析DNA加合物的量。 用这种方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应加合物,在自显影指纹图上发现5种多余的斑点,初步确定是DNA的5种加合物或加合物的衍生物.它们的修饰点是鸟嘌呤上的N-7,N-2,O~6位,修饰量在本实验的条件下是1加合物/10~4—6正常核酸.同时用这种方法测动物活细胞和环氧苯乙烯修饰反应产物,发现有DNA加合物存在.在职业接触苯乙烯工人静脉血中也发现有DNA-环氧苯乙烯的加合物,测定结果其样品指纹图与体外反应DNA指纹图类似. ~(32)P后标记方法是灵敏的,最高可侧到1加合物/10~(10)—11正常核酸,这已接近二倍体细胞的基因水平,是当今测DNA加合物方法中最     

用~(32)P后标记方法测定职业接触苯乙烯工人静脉血中DNA-环氧苯乙烯加合物

用~(32)P后标记方法,对一组22例接触苯乙烯的工人和8例未接触苯乙烯(空白)的工人进行测试,其静脉血中的淋巴细胞有4例(高浓度,大于40ppm)发现DNA-环氧苯乙烯加合物;而另外接触高浓度苯乙烯、低浓度苯乙烯和空白试样中,均未发现。在已测出的4例中,加合物形成水平为0.07—3.38加合物/10~7正常核酸,DNA的总损伤水平为5—9加合物/10~7正常核酸。 用小牛胸腺DNA、四种脱氧核苷3′-单磷酸分别与环氧苯乙烯进行体外反应,然后用~(32)P后标记法测定产物中的DNA加合物,初步确证有六种加合物及其衍生物存在,修饰位置是鸟苷碱基。并确证了其中三种加合物的化学结构,另外几种加合物的结构有待进一步鉴定。 ~(32)P后标记法测DNA加合物,灵敏度高达1加合物/10~(10)正常核酸,近于人体二倍体细胞基因水平(1.2×10~(10)碱基)。     

2-脱氧-3-磷酸胞嘧啶-苯醌加合物的确定

用~(32)P后标记法,HPLC及PEI·TLC同谱层析等方法对DNA-苯醌(BQ)加合物进行了研究,并对其中一个主要加合物进行了碱基定位,确证该斑点系BQ与分子DNA上的2′-脱氧-3′-磷酸胞嘧啶作用形成的加合物(dC-BQ加合物)。     

大气飘尘中硝基多环芳烃的高效液相色谱分析

叙述了用高效液相色谱分析大气飘尘中硝基多环芳烃化合物的方法。对硅胶柱层析预分离、硝基多环芳烃的还原反应、液-液萃取分离、液相色谱条件和响应线性范围进行了研究。在所选的荧光检测波长下,1-硝基芘和2-硝基芴的最小可测量约为20×10~(-12)g.在国内首次测定了大气飘尘样品中的1-硝基芘含量,两种试样的测定值分别为0.11和1.4ug/1000m~3。     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁英与Aroclor 1254单独与联合作用对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤效应(Damage Effects of Individual and Combined Exposure to 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-Dioxin and Aroclor 1254 on DNA in Peripheral Blood Lymphocyte of Rats)

为探讨2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)和多氯联苯(Aroclor 1254)联合染毒对大鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤效应,将20只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机均分为4组,即对照组(橄榄油)、Aroclor 1254单独染毒组(10mg·kg-1)、TCDD单独染毒组(10μg·kg-1)和联合染毒组(TCDD 10μg·kg-1+Aroclor 1254 10 mg·kg-1).大鼠每天灌胃染毒1次,连续染毒6d.染毒过程中记录大鼠的体征和体重.末次染毒后24h取外周血,分离淋巴细胞,采用碱性单细胞凝胶电泳技术(彗星试验)检测外周血淋巴细胞DNA损伤,并采用CASP软件分析各组彗星的尾部DNA百分含量(Tail DNA%)、尾长(Tail Length)和尾矩(Tail Moment).结果表明,染毒结束时TCDD单独染毒和联合染毒组大鼠体重显著低于对照组,且联合染毒组表现更为明显.TCDD单独染毒组和联合染毒组大鼠外周血淋巴细胞DNA可见明显损伤,TailDNA%、Tail Length和Tail Moment均显著高于对照组(p<0.05),且联合染毒组大鼠细胞DNA损伤更为严重,但Arolor 1254单独染毒组大鼠未见明显DNA损伤.析因分析提示TCDD与Aroclor 1254对大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤的联合毒性效应为协同作用.本研究结果表明TCDD与Aroclor 1254联合染毒可加重大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤,在对PCBs与二噁英的混合暴露进行危险性评估时要注意这种联合毒性作用.     

2-硝基芴的致突变性受共存多环芳烃的影响

本文以Ames试验的TA_(98)菌株研究了2-硝基芴(2-Nitroflurene)在其它多环芳烃共存时,其致突变性的变化.结果显示:它与其它硝基多环芳烃共存时.直接致突变性增强;而与其它无直接致突变性的多环芳烃共存时,其直接致突变性减弱,且多环芳烃的环数越多、减弱作用越强,这可能是因为硝基多环芳烃具有亲电子性,DNA的碱基有亲核性,易于结合,造成DNA的损伤;而多环芳烃一般具有供电子性,阻碍了硝基多环芳烃与DNA碱基的结合.     

苯乙烯致DNA间接损伤效应的光电化学生物传感器快速检测

许多有机化合物自身没有致癌毒性,但进入生物体内,经过体内代谢酶的催化后转化成活性中间体,与DNA形成共价化合物.这些间接的损伤会最终导致DNA分子结构和功能的变化,对人类的健康造成威胁.因此,建立一种快速有效的方法检测间接致癌化合物对DNA的损伤,成为当前研究的热点.论文建立了一种新型的光电化学生物传感器来检测有机化合物苯乙烯对DNA的间接损伤效应,该传感器以层层自组装的方式将光电信号分子、双链DNA和血红蛋白组装在半导体电极上.在H2O2存在的条件下,传感膜中的血红蛋白可将苯乙烯转化为氧化苯乙烯,氧化苯乙烯扩散到膜内,与DNA形成加合物,引起DNA结构变化,导致光电分子光电流信号的增加.实验中,将修饰好的电极置于终浓度为2mM H2O2和2%苯乙烯(体积比)的混合液(pH7.3的磷酸缓冲液配制)中反应一段时间后,在电解质溶液中进行光电流检测.实验结果表明,光电流信号随着反应时间逐渐升高,在30min后趋于稳定,表明苯乙烯在传感膜上的氧化和DNA的损伤反应基本完成.与反应前相比,反应后光电流增加了40%,并且酶催化苯乙烯生成的氧化苯乙烯经紫外可见光谱得到验证.论文建立的光电化学生物传感器模拟了体内DNA损伤反应过程,能快速有效地检测苯乙烯对DNA的间接损伤效应,有望为有机化合物潜在基因毒性的风险评估提供一个快速筛查工具。     

2,3,7,8-四氯二苯并二噁英和Aroclor 1254对大鼠睾丸的单独和联合毒性效应

为了探讨2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(TCDD)和Aroclor1254对大鼠睾丸的单独和联合毒性效应,采用2×2析因设计将SD大鼠随机分为4组,即对照组、Aroclor1254单独染毒组(10mg·kg-1)、TCDD单独染毒组(10μg·kg-1)和联合染毒组(TCDD10μg·kg-1+Aroclor125410mg·kg-1),每组5只.灌胃染毒,每天1次,连续12d.染毒结束后处死大鼠,称睾丸湿重、检测睾丸组织病理学及睾丸组织脂质过氧化状况.结果表明,各染毒组大鼠的睾丸均呈现毒性效应,表现为睾丸湿重降低,睾丸组织出现明显的病理学改变,丙二醛(MDA)水平升高、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性降低,这些毒性效应多数在联合染毒组表现更为明显.析因分析结果表明TCDD与Aroclor1254对大鼠睾丸的联合毒性效应为相加作用.以上结果提示TCDD与Aroclor1254单独和联合染毒均具有睾丸毒性,且二者的联合效应为相加作用,在对二噁英和PCBs进行环境风险评价时应考虑这种联合作用.     

亚硝酸盐存在下4-氯酚在硫酸根自由基高级氧化工艺中的转化及硝基氯酚的生成

硫酸根自由基(SO_4~(·-))高级氧化工艺(SR-AOPs)被广泛应用于土壤和地下水污染修复,然而其使用过程中生成的有毒有害副产物尚未引起重视.本研究以热活化过硫酸盐(PS)为反应体系,考察亚硝酸盐(NO~-_2)对4-氯酚(4CP)转化和产物生成的影响.色谱-质谱联用分析表明, SO_4~(·-)可介导亚硝态氮掺入4CP分子结构,生成4-氯-2-硝基酚(4C2NP).4C2NP的生成是4CP酚氧自由基(ClPhO~·)与二氧化氮自由基(NO_2~·)相互耦合的结果.在50μmol·L~(-1) 4CP、 2 mmol·L~(-1) PS、溶液pH 7.0、加热温度50℃、NO~-_2浓度50—400μmol·L~(-1)条件下,4C2NP产率介于57.9%—91.8%之间.在中性pH条件下,4C2NP在热活化PS体系中可发生进一步转化.增加NO~-_2浓度稍微抑制了4CP的转化,却显著提高了4C2NP的产率.Suwannee河富里酸(SRFA)的存在缓减了4CP的转化,但4CP转化生成4C2NP仍然是其消亡的主要途径.结果说明,在NO~-_2存在下,采用SR-AOPs处理氯酚可生成具有"三致"效应的硝基氯酚,必须引起足够重视.     

用^32P后标记方法测定典型有毒污染物的DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测定生物样品里的有毒污染物－ＤＮＡ加合物的过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成为２‘－脱氧核苷３’－单磷酸，以它为底物，在Ｔ４多核到激酶的催化下，与γ＾３２ＰＡＴＰ进行文笔磷的转移反应，形成带放射磷的２‘－脱氧核苷３’，５‘－二磷酸酯ＯＤＳ－ＴＬＣ吸附薄层板和ＰＥＩ－ＴＬＣ阴离子交换薄层板将标记过的带放射磷的＾＊３’，５‘－二磷酸酯分离分辨，然后用自显影技术制成加     

DNA adducts in fish following an oil spill exposure

On 12 December 1999, one third of the load of the Erika tanker, amounting to about 10,000 t crude oil flowed into sea waters close to the French Atlantic Coast. This oil contained polycyclic aromatic compounds (PAC) that are known to be genotoxic. Genotoxic effects induce DNA adducts formation, which can thus be used as pollution biomarkers. Here, we assessed the genotoxic impact of the “Erika” oil spill by DNA adducts detection in the liver of immature fishes (Solea solea) from four locations of the French Brittany coasts. Two months after the spill, a high amount of DNA adducts was found in samples from all locations, amounting to 92–290 DNA adduct per 10⁹ nucleotides. Then total DNA adduct levels decreased to reach about 50 adducts per 10⁹ nucleotides nine months after the spill. In vitro experiments using human cell cultures and fish liver microsomes evidence the genotoxicity of the Erika fuel. They also prove the formation of reactive species able to create DNA adducts. Furthermore, in vitro and in vivo DNA adducts fingerprints are similar, thus confirming that DNA adducts are a result of the oil spill.     

^32P后标记法测DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测ＤＮＡ－致癌物的加合物过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成２′－脱氧核苷３′－单磷酸（３′－ｄＮｍＰ＋３′－ｄｘｍＰ）,以它为底物,用Ｔ４多核苷酸激酶催化,使γ＾３２ＰＡＴＰ的放射＾３２Ｐ转移反应到底物上,形成２′－脱氧核苷３′５′．ｄＮＤＰ＋３′５′＊ｄｘＤＰ）,用ＯＤＳ－ＴＬＣ和ＰＥＩ－ＴＬＣ结合将标记过的二磷酸分离分辨,用自显影制成加合物的指纹图,液闪计数     

液相色谱-电喷雾质谱法测定污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的参数优化

在液相色谱-电喷雾质谱法测定壬基酚聚氧乙烯醚的过程中,对壬基酚聚氧乙烯醚加合离子的形成影响因素进行分析,优化了关键参数,建立了测定污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的高分辨高灵敏的液相色谱-电喷雾质谱方法.流动相A为0.1mmol·l~(-1)乙酸钠缓冲液,流动相B为甲醇,各聚合度壬基酚聚氧乙烯醚的加合离子响应值达到最大;锥孔电压没为60V能最大程度上避免[NPnEO+2Na]~(2+)对测定的干扰.NP1EO,NP2EO和NPnEOs(n=3-15)的仪器检出限分别为10pg,1pg和0.1pg.该方法成功用于污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的测定.     

Organ differences in microsomes and cytosol metabolism of Aflatoxin B1 in piglets

In order to delineate the features of aflatoxin B1 (AFB1) metabolism in various organs of piglets, in vitro metabolism of AFB1 by microsomes and cytosol of the various piglet organs was studied. The AFB1 was converted efficiently to AFP1 by the kidney microsomes. A less efficient metabolism was noted from the AFB1 to AFQ1, AFM1, and aflatoxicol (AFL) in the various organs. The microsomal ability to form AFB1-DNA adduct was higher in liver when compared to the other organs. The cytosolic glutathione-S-transferase activity to convert AFB1-epoxide to AFB1-glutathione conjugate product was relatively higher in the liver and the small intestine. The reductase activity to convert AFB1-dialdehyde to AFB1-dialcohol was similar in all the organs. The results suggest that the variation in susceptibility to the aflatoxin among different organs is attributable mainly to the organ differences in cytochrome P450 activity to form AFB1-epoxide.     

Effect of Zinc Oxide nanoparticles on cellular oxidative stress and antioxidant defense mechanisms in mouse liver

Zinc oxide nanoparticles (ZnO₂), a common ingredient of cosmetics has a huge variety of applications. Previous studies reported oxidative stress mediated toxicity of ZnO₂ nanoparticles on various mammalian cell lines. Although zinc (Zn) is an essential mineral at higher concentrations this metal is toxic. The present study focused on size determination by monitoring changes in activities of antioxidant defense mechanism in response to oxidative stress induced by ZnO₂ nanoparticles using mouse liver tissue homogenates. The study also investigated effects of oxidative stress induced DNA damage by determining formation of 8-OHdG in mouse liver homogenate. A cytotoxicity assay was also carried out in L929 cells to determine cell viability. The results of the study indicated that 50μg/ml of ZnO₂ nanoparticles induced 50% cell death. Alterations in antioxidant parameters and 8-OHdG were also noted. Data showed that there was a concentration-dependent fall in cell viability, decrease antioxidant enzyme levels and increase formation of DNA adduct (8-OHdG) when mouse liver tissue homogenate were exposed to ZnO₂ nanoparticles.