光合细菌与酵母跨界融合(杂合)子发酵味精废水研究

光合细菌球形红假单胞菌（Ｒｈｏｄｏｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）细胞分别经溶菌酶和蜗牛酶脱壁形成原生质体，在聚乙二醇（ＰＥＧ）和Ｃａ＾２＋诱导下实现了真核与原核细胞的超远缘杂交，经抗菌素培养基初步鉴定，融合产物能同时在含有链霉素和制霉菌素的培养基中生长，而双亲细胞只能在含有单一抗菌素的培养基中生长，经初筛与得获得高絮弟性     

GUS基因在诸葛菜子叶原生质体中的瞬间表达

本文以诸葛菜无菌苗子叶组织为材料，采用原生质体培养获得成功，建立了原生质体培养高频再生体系，植板率３％，植株再生频率１００％。在此基础上，本文首次研究了ＰＥＧ介导转化诸葛菜原生质体的影响因素，系统地试验了ＰＥＧ法转化子叶原生质体的过程，发现：最适质粒量为２５－３０μｇ；ＰＥＧ终浓度为１５％，ｐＨ８．０；另外，表达效率还与质粒的大小有关，较小的质粒具有相对较高的转化效率；而ＣＴ－ＤＮＡ以及热击处理未     

原生质体转化构建有机磷农药降解工程菌

降解有机磷农药甲胺磷、敌敌畏和对硫磷的菌株地衣芽孢杆菌 Ｐ１２（ Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ） 经溶菌酶处理获得原生质体,加入降解乐果的供体菌 Ｇ１ Ｄ Ｎ Ａ,经ρ（ Ｐ Ｅ Ｇ６ ０００） ＝ ３００ ｇ Ｌ－ １ 诱导,在液体再生培养基中振荡培养ｔ＝ ２０ ｈ ,使其恢复细胞壁后,离心收集菌体,涂布于含乐果的基础培养基上,经筛选得一转化子 Ｊ Ｐ Ｚ．其菌落形态明显不同于出发菌株,乐果平板连续传代１０ 次,性状保持稳定．在θ＝ ３０ ℃,１００ ｒ／ｍｉｎ 的培养条件下,３ ｄ 内对ρ（ 甲胺磷） ＝ ０ ．５ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 敌敌畏） ＝ ０ ．２ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 对硫磷） ＝ ０ ．１ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 乐果） ＝ ０ ．３ ｇ Ｌ－ １ 的降解率分别为 Ｒｄ ＝ ７９ ．１ ％ ,４６ ．７ ％ ,２９ ．４ ％ 和４６ ．４ ％ ．     

原生质体电诱导融合构建去除重金属的高效菌

研究了采用原生质体电融合技术构建高效的重金属去除菌;对影响电融合效率的几个参数,以及融合子的生长条件、除铬性能和遗传稳定性等方面进行了考察;确定了进行电融合的最佳条件,并选出 1株最好的融合株R32. 实验结果表明:R32不论是在处理低浓度还是高浓度的铬液时,其去除率和还原率都明显高于 2株亲本菌,处理低浓度含铬废水时,去除率和还原率可达到 100%;处理高浓度含铬废水(200mgL-1 )时,还原率仍可达 50%以上. 经过多次传代后,R32的除铬能力保持稳定. 当投菌量>10gL-1 (湿重)时,其去除率和还原率都在 80%以上. 正交实验结果显示,pH和Cu2 浓度对R32的生长影响都不大,这些特点都有利于R32在实际含铬废水处理中的应用. 图 4表 3参 14     

红豆杉内生真菌发酵培养基和原生质体制备酶系统的筛选

在对红豆杉内生真菌(Ozoniumsp.)适生碳源、氮源和生长情况研究的基础上,通过正交试验筛选了其发酵培养基和原生质体制备的酶系统;用L9(34)安排了四因素三水平并考虑交互作用的正交试验,对实验结果进行了分析.结果表明,最优的发酵培养基为果糖1%、蔗糖1%、蛋白胨0.2%、酵母粉0.5%、KH2PO40.5%、MgSO4·7H2O0.3%、VB10.001%;分离原生质体的最优酶系统为1.5%溶壁酶 0.5%蜗牛酶 1.5%纤维素酶 1.0%溶菌酶;用此酶系统在30℃条件下酶解3h,原生质体的产量达6.55×107个/mL酶液;经荧光素二醋酸酯(FDA)染色评估原生质体活力,表明该条件下分离的原生质体活力较高,原生质体的再生率为2.56%.该研究为利用生物技术手段改良紫杉醇生产菌奠定了基础.图6表4参32     

Analysis of parental strain DNA fragments existing in GEMs-Fhhh

There were 6 target DNA fragments of the three parental strains existing in the cell of GEMs( genetically engineered microorganism strain) Fhhh measured in this research by PCR(polymerase chain reaction). The determination showed that GEMs Fhhh contained all the 6 target DNA fragments, mnpl, mnp2, lipl, lip2, FLOI and 16S rDNA, and had the molecular genetic stability. Meanwhile the PCR production of each parental strain could only had its target DNA fragments and was different from each other. It may illustrate that the technique of the inter-kingdom protoplast fusion for the construction of GEMs Fhhh through the process of intercellular gene recombination could be used as a reliable bioengineefing technique to create the soecific functional stain for the nollution control.     

Degradation kinetics of terephthalic acid wastewater with the hybrid strains constructed with Phanerochaete chrysosporium

The degradation kinetic parameters in terephthalic acid (TPA) wastewater for the hybrid strains of Fhh and Fhhh obtained through the protoplast fusion of the fungi Phanerochaete chrysosporium (PC) and Saccharomyces cerevisiae Y99, and the native bacteria YZ1 were measured in this research. The highest level of the specific degradation rate for Fhhh and Fhh during 20h reaction were 0.2238 and 0.2163 h^‐1, which were higher than that of their three parental strains and that of the anaerobic bacteria reported. It suggested that the abilities of growth and degradation for Fhh and Fhhh in TPA wastewater were better than their three parental strains. They could create potentials for the purification of TPA wastewater with higher efficiency.     

高效絮凝菌的细胞融合及产絮特性研究

从含油废水处理曝气池活性污泥中分离到具有絮凝特性的絮凝菌株F2、F6,絮凝率在80%以上.对絮凝菌F2、F6的絮凝基因进行基因定位.首先对菌株F2、F6进行药物抗性遗传标记选择,然后提取质粒,其中F6无质粒,则絮凝基因在染色体上;F2有质粒,将具有絮凝特性的菌株F2的质粒转化到无絮凝特性的受体菌DH5α细胞中,最后对转化菌进行絮凝特性检测.结果表明,转化菌株的絮凝效果明显低于原始亲株F2.初步判断F2、F6絮凝基因定位于染色体DNA上,不在质粒上.因此,为了提高絮凝菌的絮凝效果,利用高效产絮菌株F2、F6作为亲本菌株,进行原生质体融合,对融合条件进行优化,并对融合子进行絮凝测定.实验结果确定了青霉素GK的最适浓度,F2为0.6 u·mL-1、F6为0.1u·mL-1,得到了相应的原生质体及融合子;经絮凝试验对融合子的验证,结果表明,数株融合子表现出产絮特性,融合子絮凝效果与亲本菌株F2、F6相当.     

Construction of hybrid cell with Phanerochaete chrysosporium todegrade terephthalic acid wastewater (I) phenotype evidence

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＰｈａｎｅｒｏｃｈａｅｔｅｃｈｒｙｓｏｓｐｏｒｉｕｍ (ＰＣ)ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｕｎｕｓｕａｌｗｈｉｔｅｒｏｔｆｕｎｇｉｔｈａｔｉｔｉｓａｂｌｅｔｏｍｉｎｅｒａｌｉｚｅｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｏｆｎａｔｉｖｅｌｉｇｎｉｎ .Ａｎｄｉｔａｌｓｏｃａｎｄｅｇｒａｄｅａｌｍｏｓｔａｌｌｈａｚａｒｄｏｕｓｏｒｇａｎｉｃｐｏｌｌｕｔａｎｔｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｇｅｎｅｔｉｃｍｕｔａｇｅｎｉｃａｇｅｎｔｓｓｕｃｈａｓｃｈｌｏｒｉｎａｔｅｄｏｒｇａｎｉｃｃｏｍｐｏｕｎｄｓ,ｐｏｌｙｃｙｃｌｉｃ…     

根际微生物耦合降解系统的构建及其对蒽污染土壤的修复

摘要将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的黄麻土生根际优势菌Tu-1B分别与葸高效降解菌An-2和生物表面活性剂产生菌P7-50进行原生质体电融合，得到两株具有荧光标记的融合子Tu-An和Tu-P．将二融合子接种于植物根际土壤，构建根际微生物耦合降解系统，：在40d时该系统的最大降解率为96％．对根际土壤中的Tu-An融合子进行了检测，结果表明融合子在根际能稳定旺盛生长．图3表4参18