软骨藻酸胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备软骨藻酸（DA）胶体金免疫层析快速检测试纸条,建立一种快速检测贝类食品中软骨藻酸含量的检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备颗粒直径20 nm的胶体金;电镜鉴定后,确定胶体金标记软骨藻酸单克隆抗体的最佳条件并制备金标抗体;金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫;软骨藻酸与牛血清蛋白（BSA）的偶联物构成的包被...     

水体中微囊藻毒素-LR的间接竞争ELISA检测

在自制包被完全抗原浓度为5μg/mL、单克隆抗体工作稀释度为1∶3 000、酶标二抗鼠工作稀释度为1∶3 000、微囊藻毒素-LR浓度在0.001～30μg/L、显色底物为邻苯二胺,采用间接竞争酶联免疫吸附试验对水体中的微囊藻毒素-LR进行检测,结果表明,该方法与高效液相色谱的检测结果相关系数大于0.99,多次重复实验相对标准偏差小于10%,最低检测限能达到0.01μg/L,定量检测区间为0.01～3μg/L,该方法对[4-精氨酸]微囊藻毒素能特异性识别,对来自实际水样中的干扰有相当的耐受力.     

间接竞争ELISA方法测定水中2，4-D的研究

以2,4-D-BSA为包被抗原,采用自行制备的2,4-D单克隆特异性抗体6D11建立了水中2,4-D的间接竞争 ELISA检测方法．本研究比较了包被抗原2,4-D-BSA浓度分别为240ng·mL-1、120ng·mL-1和60ng·mL-1的反应体系和竞争反应时间为60min和15min的间接竞争ELISA剂量-反应曲线,确定了当包被抗原浓度为60 ng·mL-1、竞争反应时间为15min时,剂量-反应曲线的IC50值较低．采用上述实验条件分别测定了由PBS缓冲溶液、饮用水、清华大学地下水和圆明园福海地表水配制的2,4-D标准溶液的剂量．反应曲线,发现实际水样的基质效应对检测结果的影响较大;采用实际水样和PBS缓冲溶液配水在含有5％乙醇的PBS缓冲体系中反应的方法,基本上消除了基质效应对检测结果的干扰．采用上述优化试验条件,测定2,4-D浓度分别为0．5mg·L-1、0．125mg·L-1和0．03mg·L-1的加标样品,测定数据的准确度符合痕量有机污染物定量检测对准确度的要求,但是平行样品测定数据之间的变异系数较大,需要进一步改进检测方法,用于实际水样的检测．     

直接竞争ELISA检测拟柱孢藻毒素的方法建立和评价

拟柱孢藻毒素(CYN)对人和动物具有高毒性而在世界上广受关注,快速检测方法的建立可为蓝藻毒素的风险评估提供有效的技术手段.本研究基于前期制备的CYN的单克隆抗体N8,旨在建立一种CYN的快速免疫检测方法-直接竞争ELISA.在对HRP-CYN酶标记物和N8单抗的稀释度进行优化后,最适反应条件下建立的直接竞争ELISA在0～200ng/mL CYN浓度下呈现典型的S型反应曲线,该方法的灵敏度为0.069ng/mL,经logit-log拟合的线性范围为0.1～10ng/mL,检出限远低于WHO建议的0.7ng/mL CYN的安全限值.本研究建立的ELISA方法对水库水样和小球藻稀释液中加标回收率分别为80.44%～125.4%和52.97%～155.19%,在测定CYN时与商业Beacon试剂盒的检测结果高度一致.对大沙河水库中CYN的监测表明该毒素在水体中常年存在,但未超过WHO建议的安全限值.本研究发展的ELISA可实现水样和藻样中CYN的快速检测,为供水安全保障提供一种新的技术手段.     

单克隆抗体间接竞争ELISA测定水体中氟虫腈

制备了氟虫腈单克隆抗体 ,在此基础上建立了水体中氟虫腈测定的间接竞争性酶联免疫吸附测定 (ELISA)法 .在优化条件下 ,氟虫腈测定的线性浓度范围为 1 0 -1 μg·L-1 ～ 1 0 3μg·L-1 ,最低检出浓度 (I1 0 )为 0 0 8μg·L-1 ,检测灵敏度 (I50 )为6 6 8μg·L-1 ;常见的几种与氟虫腈结构类似的农药的交叉反应率均低于 1 % ,不干扰氟虫腈的检测 ;2 0 %丙酮、5 %甲醇、2 %二甲基甲酰胺、2 %乙腈和 2 %乙酸乙酯基本不影响免疫测定 .利用建立的间接竞争性ELISA方法检测不同水样中氟虫腈 ,结果表明不同水样均可直接进行测定 ,方法的精密度和准确度均符合残留测定的要求     

在添加醋酸钾的营养富集培养基中培养杂交瘤细胞(英)

营养富集、添加醋酸钾和灌注培养都是改善杂交瘤细胞培养的策略在Cp9B细胞的静止分批培养中，添加氨基酸和维生素延长了培养时间，但对最大细胞密度影响不大，在反应器分批培养中，营养物明显促进细胞增殖，最大细胞密度比原来提高35倍．利用添加1g／L醋酸钾的反应器灌注培养实验说明，从普通培养基转到营养富集培养基，反应器中的平均细胞密度、抗体浓度和抗体滴度得到了进一步的提高，在培养上清中，乳酸、氨和丙氨酸大量积累，葡萄糖和某些氨基酸大量消耗，以致于可能造成对细胞生长和代谢的抑制。     

胶体金免疫层析试纸条检测环境样品中的镉(Ⅱ)

研制了大米及河水样品中镉残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条。实验结果表明,制备的试纸条对Cd(Ⅱ)-EDTA标准溶液的最低检测限为20μg/L;除了与Hg(Ⅱ)-EDTA及Fe(Ⅲ)-EDTA轻微交叉反应外,与Cr(Ⅱ)-EDTA、Pb(Ⅱ)-EDTA、Cu(Ⅱ)-EDTA等金属螯合物无交叉反应;试纸条在常温下放置18周稳定性良好;对河水及大米中Cd(Ⅱ)的最低检测限分别为5μg/L和0.5μg/g,与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)的检测结果一致。胶体金免疫层析试纸条法操作简便,能满足样品的检测要求,适用于污染地区大米及河水样品中重金属Cd(Ⅱ)残留的快速检测。     

重金属pb2单克隆抗体的制备

为了开发环境中重金属Pb2+的快速检测技术,研究制备了高特异性抗铅单克隆抗体.选择CHX- A"- DTPA(p- SCN- Bz-CHXDTPA)作为双功能鳌合剂,偶联载体蛋白和pb2+,制备完全抗原Pb - CHX -A"- DTPA - KLH.用ICP- AES对此完全抗原Pb2+质量浓度进行检测,其结果为38.02 mg/mL.以此抗原免疫小鼠,用间接ELISA方法检测免疫小鼠抗血清,其效价为1:81 920以上,并且含Pb2+抗原(Pb-CHX -A"- DTPA - BSA)检测OD值远大于无Pb2+抗原(CHX - A"- DTPA - BSA).经过细胞融合、杂交瘤筛选以及克隆化等步骤,建立了分泌重金属Pb2+的单克隆抗体的细胞株1D4.与其他7种金属离子的交叉反应结果表明,该抗体是特异性针对Pb2+的.最后用小鼠体内诱生法生产抗Pb2+腹水型单抗,其效价为1:409 600.     

生物课堂上的问题串教学设计实例

问题能激起学生思维的积极性和求知的渴望。学生思维活化的源头,是主动学习的基础,是课堂的"灵魂",它直接影响着整堂课的教学效果。因此,在高中生物必修3动物细胞工程课堂教学中,设计了一系列问题,形成问题串贯穿整个课堂。     

抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

为了构建针对石油运输泄露导致的海洋环境中萘等多环芳烃污染的免疫学快速检测方法,需获得高效稳定的分泌抗萘单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文以2-萘丁酸-KLH为免疫抗原免疫BALb/c小鼠,间接竞争ELISA测定小鼠血清效价,用细胞融合筛选技术筛选抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株,捕获ELISA测定小鼠免疫球蛋白亚型。结果显示,实验小鼠免疫血清效价最高能达到1:80000,经过HAT筛选、复检和亚克隆后得到5个能分泌抗萘单克隆抗体的细胞株,细胞株上清液效价最高能达到1:15625,抗萘单克隆抗体免疫球蛋白亚型均为IgG1,Kappa轻链。本方法成功构建的杂交瘤细胞株能稳定高效分泌抗萘单克隆抗体,抗体亚型符合免疫学检测的特性,为萘的ELISA检测方法建立及胶体金免疫层析（GICA）试纸条的研制提供了稳定高效的单克隆抗体源。