膝沟藻毒素GTX1-4单克隆抗体的制备与鉴定

研究膝沟藻毒素GTX1-4单克隆抗体的制备方法。利用甲醛法合成GTX1-4人工抗原，通过小鼠免疫和单克隆抗体技术制备GTX1-4单克隆抗体。结果显示，合成了免疫抗原GTX1-4-BSA和检测抗原GTX1-4-KLH，其偶联比分别为10.7∶1与22.4∶1。筛选出3株能稳定分泌GTX1-4单克隆抗体的杂交瘤细胞1-A4、5-E11和5-A11。5-E11、1-A4诱生腹水单克隆抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a，效价均达到64000；5-A11诱生腹水单克隆抗体的亚型为IgG1，效价达到128000。5-A11诱生腹水单克隆抗体的灵敏度为6.25 μg/mL，特异性较强。本实验成功合成了GTX1-4人工抗原，并获得了能够稳定分泌GTX1-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

应用基于单克隆抗体的免疫传感器检测环境中的芘和苯并芘

多环芳烃是一类普遍存在的环境污染物,可以诱发癌症,对人们的健康造成严重威胁.本研究利用一种四环芳烃芘的衍生物作为半抗原,利用活泼酯法合成人工抗原免疫小鼠研制多环芳烃单克隆抗体.通过非竞争性ELISA与竞争性ELISA相结合的筛选方式得到一株单克隆抗体,命名为6A6.该抗体能特异性识别芘和苯并芘,其IC50值分别为8.1μg·L-1和6.8μg·L-1,对其他多环芳烃的交叉反应率均低于5%.在此基础上,建立了免疫传感器法对芘和苯并芘进行检测,线性范围为0.2~10.0μg·L-1.利用该方法对添加在水样中的样品进行回收,并与传统ELISA方法进行比对,结果证明传感器法检测更加快速且灵敏度更高.该方法可以用于含有芘和苯并芘的环境样品的快速筛选,可以在10 min内初步获得检测结果.     

微囊藻毒素-LR多克隆抗体的制备

通过对新西兰大白兔免疫自制的微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)完全抗原BSA-MC-LR,获得了质量较好的抗MC-LR的多克隆抗体,间接ELISA表明抗体的效价能达到1.5×10⁵;固定包被抗原OVA-MC-LR,采用间接竞争ELISA测定水体中的微囊藻毒素,标准曲线表明对水样中MC-LR的检测下限为10ng/L,线性区间为30ng/L·3μg/L,能满足对饮用水和地表水中MC-LR的检测要求.     

华溪蟹功能性重组金属硫蛋白的表达及抗血清制备

采用SUMO融合表达系统表达河南华溪蟹金属硫蛋白(Metallothionein,MT),经Ni离子螯合柱分离纯化后,用SDS-PAGE、紫外光谱扫描鉴定,并对重组MT的金属结合及清除自由基能力进行了检测.同时,利用纯化的融合蛋白SUMO-MT免疫BALB/c小鼠制备抗血清,间接ELISA检测该抗血清的效价,Western blot和免疫组化染色检测其特异性.结果表明,河南华溪蟹MT以可溶形式获得表达,经金属螯合层析纯化后分析仍具有金属结合特性和清除羟自由基的生物学功能.免疫BALB/c小鼠后获得特异性的抗MT抗血清,该抗血清具有较高的效价和良好的特异性,可识别组织MT,用于免疫组化分析.     

草丁膦人工抗原的合成与免疫效价的测定

用戊二醛作为交联剂合成草丁磷-卵清蛋白(oviparous,OVA)人工抗原,通过紫外吸收、31P核磁扫描的方法检测和鉴定草丁磷人工抗原,并用此合成抗原免疫小鼠,检测抗体的生成。结果表明,人工抗原紫外吸收光谱与OVA、草丁磷光谱相比发生了改变,人工抗原、草丁磷31P核磁光谱位移大致相同,通过计算人工抗原中草丁磷与卵清蛋白的偶联比是36.7∶1。免疫小鼠数周后在其血清中检测出抗体(其血清的效价为1∶320000)。草丁磷人工抗原合成及对小鼠的免疫成功,为制备草丁磷单克隆抗体打下了基础。     

氯菊酯农药抗体制备及酶标抗原合成

为建立一种快速检测氯菊酯的酶免疫学方法,以自制的氯菊酯半抗原(Py)与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到免疫原.免疫健康新西兰白兔获得特异性多克隆抗体.用间接酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定抗体效价为1:2500和1:4000.合成了辣根过氧化物酶(HRP)标记抗原(HRP-Py),并经紫外分光光度法鉴定,摩尔分子比为2.5:1.     

水环境中大肠杆菌多特征抗原及抗体的制备研究

为了建立用于水环境中大肠杆菌的酶联免疫快速检测方法,针对水中大肠杆菌属多种血清型的特征,制备了水环境样品中大肠杆菌的多特征抗原,包括全菌体抗原、破碎全菌体抗原、菌体抗原、鞭毛抗原和菌毛抗原;采用这5种大肠杆菌抗原分别免疫新西兰大白兔,获得了5种大肠杆菌多克隆抗体,抗体效价高、纯度好,具有较强且稳定的特异性结合抗原的功能;间接ELISA方法表明,全菌体抗体和破碎全菌体抗体的效价均大于1×10⁵,性能优良.基于上述抗体,建立了水中大肠杆菌间接ELISA检测方法,实际水样的检测结果表明,检测限可达10⁴个/L.     

间接竞争ELISA法测定稻田土壤中除草剂毒莠定的残留量

通过对反应体系中酶标二抗(辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG)和抗体的最佳稀释浓度等条件的筛选和确定,最终建立了一种快速灵敏地测定污染稻田土壤中毒莠定残留量的方法--间接竞争ELISA分析方法.结果表明,酶标二抗和抗体的最佳稀释度均为1:500(体积比),毒莠定的检出下限达到5 ng·mL-1,在0.07～0.7μg·mL-1浓度范围内有良好的线性;土壤浸出液加样的平均回收率为104.11%,变异系数在3.13%～11.13%之间,符合农药残留分析的要求;样品基质对检测结果没有干扰.     

环境化学物对体液免疫影响的测定

经常接触低剂量或无明显毒作用剂量的某些环境化学物,会引起机体免疫功能的损害。这种损害,可通过体液免疫和细胞免疫的降低反映出来。因此,在评价化学物的安全性中,尚需建立一个能快速筛选化学物是否具有免疫抑制作用的实验方法。本文介绍一种用分光光度计测定的,以小鼠抗绵羊红细胞(SRBC)的血清溶血素和脾脏抗体形成细胞(PFC)为指标的体液免疫模型,并选用苯、多氯联苯(PCB)     

软骨藻酸直接竞争ELISA方法的建立及优化

为建立软骨藻酸(domoic acid,DA)直接竞争ELISA方法快速检测样品中的软骨藻酸,本研究利用碳化二亚胺法将辣根过氧化物酶(HRP)标记软骨藻酸(DA),成功制得偶联物DA-HRP.在前期已制得抗软骨藻酸单克隆抗体的基础上,利用酶标抗原和单克隆抗体的特异性反应,对软骨藻酸进行定量分析.通过对封闭液、封闭时间和温育温度的优化,建立标准曲线.结果表明以1%明胶作为封闭液,在37℃下封闭1 h,加入单抗37℃温育1 h是直接竞争ELISA法的最佳反应条件,方法检出限为3.58 ng.mL-1,孔间变异系数均≤15%,加标回收率为80%～120%,检测速度较快,1.5 h内可检测出一批样品,适用于现场和批量检测,具有广泛的发展前景.     

一种可商业化生产的胶体金快速免疫层析卡:检测大田软海绵酸及其衍生物(DTX1, DTX2)

建立一种胶体金快速免疫层析检测贝类体内腹泻性贝毒主要成分软海绵酸及其衍生物鳍藻毒素的方法。合成偶联抗原OA-OVA,将适当浓度的偶联抗原和HRP标记的羊抗鼠IgG分别包被在试纸条的检测线和控制线上,胶体金标记的抗OA单克隆抗体包被金标垫,优化检测线的最佳包被浓度等条件以得到最低检出限。结果表明:该试纸条的检出限为16 ng/mL（OA,DTX1 & DTX2）,检测时间为10 min。本研究所建立的胶体金免疫层析检测贝类中大田软海绵酸及其衍生物鳍藻毒素的方法可以满足规定的160 μg/kg贝肉的安全阈值,可以应用于实际贝类样品的腹泻性贝毒的半定量检测。     

Preparation of hapten-specific monoclonal antibody for cadmium and its ELISA application to aqueous samples

High-affinity and specific monoclonal antibodies against cadmium-ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA) complex have been produced using the hybridoma technique. A hapten was synthesized and characterized by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR) and UV-Vis. Competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for quantitative detection of cadmium in aqueous sample was developed. The monoclonal antibody with high level of binding affinity for Cd-IEDTA-BSA and high specificity for soluble Cd-EDTA complex showed less than 0.99% cross-reactivity with other 11 metals. The limit of detection was 0.10 μg·L⁻¹, and the effective linear range was 10⁻¹–10³ μg·L⁻¹. The intra- and inter-assay coefficient variations were 1.5%–6.3% and 3.2%–7.4%, respectively. The spike recovery in different water samples were between 98.5% and 110.3%. The detection limit of this assay was well below the allowable concentration of cadmium (3 μg·L⁻¹), and the working range was wider than that of other methods which showed the range of 2.19–86.38 and 0–10³ μg·L⁻¹. The competitive ELISA established in this paper was sensitive and accurate in the screening of cadmium in aqueous samples. The results will lay a solid foundation for construction of an immunoassay kit for cadmium.     

Determnation of ochratoxin A in grain by monoclonal antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay

ＤｅｔｅｒｍｎａｔｉｏｎｏｆｏｃｈｒａｔｏｘｉｎＡｉｎｇｒａｉｎｂｙｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙＹａｎｇＣｈｕａｎｈｅ；ＬｕｏＸｕｅｙｕｎ；ＬｉｕＣｈａｎｇ；ＬｉＷｅｎ...     

软骨藻酸胶体金免疫层析检测试纸条的研制

制备软骨藻酸（DA）胶体金免疫层析快速检测试纸条,建立一种快速检测贝类食品中软骨藻酸含量的检测方法.采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制备颗粒直径20 nm的胶体金;电镜鉴定后,确定胶体金标记软骨藻酸单克隆抗体的最佳条件并制备金标抗体;金标抗体喷涂在玻璃纤维垫上制成胶体金结合垫;软骨藻酸与牛血清蛋白（BSA）的偶联物构成的包被...     

酶联免疫吸附分析法测定水样中的毒死蜱

自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经简单前处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得水样中毒死蜱的添加回收率为93.40%～102.1%,C.V为4.04%～5.18%,在水样中的最低检出浓度为0.08μg/L,检测灵敏度远高于GC,符合农药残留检测的要求。