氯菊酯农药间接酶联免疫吸附测定法的建立

为测定环境样品中氯菊酯农药残留,用活泼酯法将氯菊酯半抗原(Py)与卵白蛋白(OVA)偶联,制备合成抗原Py-OVA作包被原,建立间接竞争酶联免疫吸附测定法.方阵滴定确定了抗血清最佳稀释度(1∶2 500),包被抗原的最适工作浓度0.45μg/mL,并建立了标准工作曲线.工作曲线表明在10～800μg/L浓度范围内呈良好的线性关系,回收率>97%.     

生物吸附剂ZL5-2对Cr(Ⅵ)的吸附机理

为测定环境样品中氯菊酯农药残留,用活泼酯法将氯菊酯半抗原(Py)与卵白蛋白(OVA)偶联,制备合成抗原Py-OVA作包被原,建立间接竞争酶联免疫吸附测定法.方阵滴定确定了抗血清最佳稀释度(1∶2 500),包被抗原的最适工作浓度0.45μg/mL,并建立了标准工作曲线.工作曲线表明在10～800μg/L浓度范围内呈良好的线性关系,回收率>97%.     

模拟巢湖流域氯菊酯的迁移转化和生态风险

近年来,随着大量使用拟除虫菊酯类杀虫剂,导致的环境问题已得到广泛关注.为认识巢湖流域氯菊酯在环境中的赋存状态、迁移转化、环境归趋和生态风险,本研究结合多介质归趋模型和物种敏感性分布模型(SSD),模拟了稳态假设下氯菊酯在巢湖生态系统各环境介质中的浓度分布、迁移通量和去除途径,并通过灵敏性分析和不确定性分析对各输入参数进行了评价.进一步构建污染物的SSD模型,评价了氯菊酯在稳态条件下的潜在生态风险,预测了保护系统中95%的物种时允许最大年输入量.结果表明,氯菊酯在大气相、水体相、沉积物相中的浓度分别为3.99×10~(-16)、5.63×10~(-11)和1.95×10~(-5)mol·m~(-3),沉积物是氯菊酯的最大储库;大气中的氯菊酯主要以挥发形式进入,通过空气颗粒物干沉降消减;水体中的氯菊酯主要以平流输入为主进入,通过底泥沉降消减;沉积物中的氯菊酯主要以底泥沉降形式进入,通过底泥再悬浮和掩埋消减.此外,SSD模型预测的HC5浓度为0.97 ng·L~(-1),假设稳态下预测的水体浓度远低于该值,仅对巢湖流域0.77%的物种产生影响,当年输入量低于78.2 t的情况下,巢湖水体中95%的物种不会受到氯菊酯的威胁.     

氯菊酯在不同质地土壤中的光降解动力学规律

为了研究氯菊酯在土壤中的光降解规律,更好地为其在自然环境中的降解提供理论依据,探讨了氯菊酯在不同质地土壤中,不同条件下的光降解动力学规律。结果表明:氯菊酯降解符合准一级动力学规律,氯菊酯的降解受土壤质地的影响较大,在不同土壤中降解率为:壤质砂土砂质壤土壤质黏土,日光比紫外光照射下腐殖酸对氯菊酯的降解影响明显,随着腐殖酸浓度的增加,它对氯菊酯的降解作用先促进后抑制。     

淡色库蚊二氯苯醚菊酯水解酶研究

本实验比较了对拟除虫菊酯抗性和敏感淡色库蚊幼虫的二氯苯醚菊酯水解酶的活力和性质,结果表明:(1)无论抗性和敏感品系都专一性地水解反式二氯苯醚菊酯,而对顺式异构体不降解。(2)酶活力主要集中在无细胞器结构的细胞浆内。(3)拟除虫菊酯抗性淡色库蚊的二氯苯醚菊酯水解活力比敏感品系大约一倍。(4)抗性和敏感品系二氯苯醚菊酯水解酶的米氏常数、最适反应pH、最适反应温度相近,但最大反应速度则抗性比敏感品系大2.3倍。这表明抗性的产生主要由于酶量的增加,而不是酶系发生变化。     

太湖及辽河流域表层沉积物中拟除虫菊酯的浓度水平及毒性评估

对辽河和太湖流域表层沉积物中8种常见的拟除虫菊酯:联苯菊酯、高效氯氟氰菊酯、氯菊酯、甲氰菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯进行分析测定.结果显示,太湖流域中拟除虫菊酯含量范围为0.02～2.91ng·g-1(干重,下同),平均含量为0.63ng.g-1,处于相对较低的水平;辽河流域中的含量相对较高,其范围是0.14～19.6ng·g-1,平均含量为6.20ng·g-1.采用毒性单元TU(选用钩虾Hyallela Azteca的LC50)对拟除虫菊酯毒性风险进行估算,太湖流域∑TU值范围是0～0.40,相比之下,辽河流域的∑TU值高出很多,范围在0.10～1.73之间,其中有3个点位的∑TU值大于1,表明其具有一定的生态风险,其毒性主要来源于氯氰菊酯和氰戊菊酯.     

拟除虫菊酯对人红细胞膜结构的影响

研究了5种拟菊酯即北京菊酯、杀灭菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯和氯菊酯对人红细胞膜上DPH光谱及荧光各向异性(r)的影响,观察了胰蛋白荧光及人红细胞溶血的变化.氯菊酯以干扰膜脂排列影响r值,浓度达到50μmol/L时,r值开始明显降低;其他4种含氰基拟菊酯则以干扰膜脂排列和DPH荧光碰撞猝灭作用共同影响r值.研究结果还表明,拟菊酯同时作用于膜脂区和膜蛋白的疏水部分,降低膜脂的有序排列,这些变化与拟菊酯对红细胞的溶血作用一致.     

拟除虫菊酯类杀虫剂的酶促降解

测定了降解菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ｓｐ．ＹＦ １１粗酶液对拟除虫菊酯杀虫剂的降解性能,粗酶液降解杀灭菊酯、甲氰菊酯、氯氯菊酯、溴氰菊酯氯菊酯、三氟氯氰菊酯的最适ｐＨ分别为８．０、８．５、８．０、８．０、９．０、７．５;米氏常数分别为４１．４、１３６．８、６５．４、２２２．８、５．２、８．６７ｎｍｏｌ／ｍｌ;最适温度为３２．５℃,该粗酶液在ｐＨ５．０－１０．５均具有降解活性。     

大型水蚤生物检测系统对新农药速灭杀丁的毒性评价

速灭杀丁(Fenvalerate,Sumicidin 20％(?)C),又叫杀灭菊酯、戎酸氰醚酯、氰戎菊酯、S-5602。商品名叫来福灵,化学名称为a氰基-3-苯氧基苄基-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸酯。化学结构式:     

拟除虫菊酯类农药残留降解菌产气肠杆菌的分离、鉴定及降解特性研究

采用室内培养方法,从拟除虫菊酯类农药生产车间下水道驯化污泥中分离、筛选出1株可同时降解对联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯的高效菌株M6R9,经鉴定为产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes),并对其生理特性进行研究.结果表明,该菌为革兰氏阴性好氧型杆菌,大小约为长(0.8~1.9)μm、宽(0.5~1.0)μm,能够以3种菊酯农药为碳源生长.在通气、pH 7.0、温度(25~30)℃、接菌量D415 nm=0.2、农药浓度100 mg.L-1和转速180 r.min-1的环境条件下,对含有联苯菊酯、甲氰菊酯和氯氰菊酯各100 mg.L-1的混合培养基培养3 d,发现该菌对3种菊酯降解效果最好,降解率分别为55.74%、55.11%和56.96%,且降解过程满足一级动力学方程模型,降解半衰期(t1/2)分别为65.4、70.7和68.6 h.3种菊酯农药降解率与接菌量、通气量和振荡速率呈正相关.     

抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

为了构建针对石油运输泄露导致的海洋环境中萘等多环芳烃污染的免疫学快速检测方法,需获得高效稳定的分泌抗萘单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文以2-萘丁酸-KLH为免疫抗原免疫BALb/c小鼠,间接竞争ELISA测定小鼠血清效价,用细胞融合筛选技术筛选抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株,捕获ELISA测定小鼠免疫球蛋白亚型。结果显示,实验小鼠免疫血清效价最高能达到1:80000,经过HAT筛选、复检和亚克隆后得到5个能分泌抗萘单克隆抗体的细胞株,细胞株上清液效价最高能达到1:15625,抗萘单克隆抗体免疫球蛋白亚型均为IgG1,Kappa轻链。本方法成功构建的杂交瘤细胞株能稳定高效分泌抗萘单克隆抗体,抗体亚型符合免疫学检测的特性,为萘的ELISA检测方法建立及胶体金免疫层析（GICA）试纸条的研制提供了稳定高效的单克隆抗体源。     

单克隆抗体酶免疫分析法测定大米中杀虫脒残留量

用抗杀虫脒单克隆抗体为试剂,建立了间接竞争法,直接竞争法和标记抗原的竞争法等３种测定大米中杀生脒残留量的ＥＬＩＳＡ法,标准曲线上抑制率为５０％时对应的杀虫脒浓度分别为１．３、１．７和５．３ｎｇ／ｍｌ,大米样品用甲醇提到,提取液经吸附剂柱简单净化后即可用上述ＥＬＩＳＡ对痕量杀虫脒进行定量,使用直接竞争法时,样品加标回收率为９０％－１１６％,平行测定的相对标准偏差为５．１％－１６％,方法检出限为０．５     

酶联免疫吸附分析法测定水样中的毒死蜱

自制了毒死蜱多克隆抗体,考察了离子强度和甲醇含量对抗原抗体竞争反应的影响,对反应体系进行了优化,最终建立了水样中毒死蜱的残留检测ELISA方法。结果表明,毒死蜱对抗体竞争性结合的I50为76.8μg/L,方法检出限为5.2μg/L。河水样品经简单前处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得水样中毒死蜱的添加回收率为93.40%～102.1%,C.V为4.04%～5.18%,在水样中的最低检出浓度为0.08μg/L,检测灵敏度远高于GC,符合农药残留检测的要求。     

微囊藻毒素-LR多克隆抗体的制备

通过对新西兰大白兔免疫自制的微囊藻毒素-LR(Microcystin-LR,MC-LR)完全抗原BSA-MC-LR,获得了质量较好的抗MC-LR的多克隆抗体,间接ELISA表明抗体的效价能达到1.5×10⁵;固定包被抗原OVA-MC-LR,采用间接竞争ELISA测定水体中的微囊藻毒素,标准曲线表明对水样中MC-LR的检测下限为10ng/L,线性区间为30ng/L·3μg/L,能满足对饮用水和地表水中MC-LR的检测要求.     

六种农药对固氮螺菌(Azospirillum brasilense)固氮酶和吸氢酶活性的影响

本文研究了6种化学农药对植物根际和根表固氮微生物固氮螺菌(A.brasilense)的固氮酶和吸氢酶活性的影响。实验采用半固体培养基并分别加入不同浓度的农药,还设有加苹果酸钠和不加苹果酸钠两种处理。结果表明,农药对固氮螺菌两种酶活性的作用可分为三种类型:具明显的抑制作用(如六六六和二氯苯醚菊酯)、具刺激作用(如水胺硫磷和灭线磷)和加苹果酸钠时有刺激作用(如速灭杀丁和溴氰菊酯)。     

剑尾鱼卵黄蛋白原的ELISA检测

以卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv)抗血清为抗体,以纯化的卵黄蛋白原(vitellogenin,Vtg)为抗原,建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测剑尾鱼(Xiphophorus helleri)雄鱼整体匀浆液中ρ(Vtg).结果表明,该方法的检测灵敏度为7.8 ng/mL,批内变异系数为5.094%,批间变异系数为5.540%,工作范围为32.5～2 000 ng/mL,在该范围内,标准曲线具有良好的线性和重复性.由于该方法可直接在1块或在不同的酶标板上准确地进行比较,因而可利用ELISA方法测定经诱导雄鱼整体匀浆液中ρ(Vtg)水平.结果显示,50 μg/L 17-β雌二醇(E₂)诱导21 d的雄性剑尾鱼有明显的Vtg产生;10 μg/L E₂诱导剑尾鱼亦有Vtg产生,但较50 μg/L E₂诱导组低;1 μg/L E₂诱导组及对照组剑尾鱼没有Vtg产生,检测孔OD450/对照OD₄₅₀(P/N)值小于2.1.      

Real-time fluorescent quantitative immuno-PCR method for determination of fluoranthene in water samples with a molecular beacon

A reliable and sensitive competitive real-time fluorescent quantitative immuno-PCR (RTFQ-IPCR) assay using a molecular beacon was developed for the determination of trace fluoranthene (FL) in the environment. Under optimized assay conditions, FL can be determined in the concentration range from 1 fg/mL to 100 ng/mL, with y = 0.194x + 7.859, and a correlation coe cient of 0.967 was identified, with a detection limit of 0.6 fg/mL. Environmental water samples were successfully analyzed, recovery was between 90% and 116%, with intra-day relative standard deviation (RSD) of 6.7%–12.8% and inter-day RSD of 8.4%–15.2%. The results obtained from RTFQ-IPCR were confirmed by ELISA, showing good accuracy and suitability to analyze FL in field samples. As a highly sensitive method, the molecular beacon-based RTFQ-IPCR is acceptable and promising for providing reliable test results to make environmental decisions.     

鲫鱼(Carassius auratus)卵黄蛋白原的ELISA检测

采用Sephadex G-200柱层析从鲫鱼(Carassius auratus)成熟鱼卵中提取卵黄脂磷蛋白并制备抗卵黄脂磷蛋白抗血清.用DEAE-cellulose阴离子交换层析和Sephacryl S-300分子筛凝胶层析相结合的两步层析从经17b-雌二醇诱导的雌鱼血浆中提纯卵黄蛋白原.免疫印迹反应显示卵黄脂磷蛋白和卵黄蛋白原都与抗卵黄脂磷蛋白抗血清有特异的反应.以抗卵黄脂磷蛋白抗血清作为抗体,卵黄蛋白原作为竞争抗原建立了间接竞争法酶联免疫吸附反应(ELISA)方法来检测雄鱼血液中卵黄蛋白原含量.该方法可测的最低浓度为7.8ng/mL,工作范围为0.39~25mg/mL,批内和批间误差分别为6.5%和7.5%.