岩豆凝集素的纯化及其分子残基的化学修饰和活性关系

岩豆种子经侵取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析，获得ＦＰＬＣ上单一的凝集素样品，对此纯化的凝集素样品用Ｎ－溴代丁二酰亚胺、Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺、二流苏糖醇，碘乙酸和对氯汞苯甲酸修饰其分子内的色氨酸和巯基．经计算，该凝集素分子内含有４个色氨酸和２４个流基，当色氨酸被修饰后其凝集活性全部丧失，而巯基被修饰后对其凝血活性无任何影响，表明巯基与凝集素分子的凝血活性无关，而色氨酸则是凝集活性所必需的基团．     

人类无精症相关新基因ZNF313启动子的初步分析

采用PCR方法扩增了ZNF313基因的启动子序列,构建了含人ZNF313基因启动子不同片断的荧光素酶报告基因表达体系.以pRLTK为内参照质粒,瞬时转染HEK293T细胞,48h后收集细胞,测定荧光素酶的相对表达活性.结果发现,在ZNF313基因的启动子区域构建了4种荧光素酶报告基因表达体系,即pGL3215(-215bp～ 38bp)、pGL3160(-160bp～ 38bp)、pGL3133(-133bp～ 128bp)和pGL38(-8bp～ 128bp).其中pGL3215表达载体的荧光素酶相对表达活性最高;pGL3160和pGL3133表达载体的荧光素酶相对表达活性几乎相同,且是pGL3215的75%;而pGL38的荧光素酶相对表达活性急剧下降,接近于零.这表明,-133bp～-8bp区域内含有人ZNF313基因转录所必需的启动子序列.生物信息学的分析表明,两个SP1、一个AP2和一个TAg是人ZNF313基因启动子所必需的.图4参19     

利用荧光淬灭作用研究川泽泻凝集素微环境与生色基团的空间分布

用不带电荷的极性淬灭剂丙烯酰胺和带电荷的I-离子、Cs 对川泽泻凝集素内源荧光进行淬灭研究,以揭示凝集素与小分子物质相互作用以及凝集素荧光生色基团的分布情况.天然川泽泻(Alisma plantago-aquatica Linn)凝集素在280nm和295nm波长下均显示λmax为328nm的荧光发射光谱,表明凝集素荧光生色基团位于相对疏水的环境中.中性淬灭剂丙烯酰胺对凝集素分子的荧光生色基团Tyr和Trp残基的可接近程度为96.81%,而对阴离子淬灭剂I-离子和阳离子淬灭剂Cs 离子的可接近程度分别为37.17%和21.96%.表明川泽泻凝集素荧光氨基酸残基主要位于分子内部的疏水核心.图3参22     

氨基酸侧链基团的特异性化学修饰对玉帘凝集素凝血活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的影响

石蒜科植物玉帘 (ZephyranthescandidaHerb)的球茎 ,经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE -Sepharose和SephacrylS - 10 0分子筛层析 ,分离纯化出玉帘凝集素 (Z .candidaaggulutination ,ZCA) ,在SDS -PAGE显示单一蛋白带 ,经分子筛层析测得相对分子量 (Mr)约为 4 8× 10 3 .采用不同的化学修饰试剂对玉帘凝集素中的不同氨基酸侧链基团进行修饰 .结果表明 :Arg残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 73% ,Trp残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 36 % ;Ser/Thr残基的修饰导致促淋巴细胞有丝分裂活性下降 2 9.3% ,细胞分裂比率下降 7.2 % .图 3表 2参 12     

红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycorisradiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L. radiataagglutinin, LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,SephacrylS-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0. 95μg/mL和1. 9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低II型人类单纯疱疹病毒(HSV-II)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50 ) =5~10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性. 图1表6参15     

根肿(Plasmodiophora brassicae)休眠孢子的纯化和超声波破碎方法研究

根肿(Plasmodiophora brassicae Woronin)是严重危害十字花科植物的世界性病害.采用蔗糖密度梯度离心和超声波处理方法从油菜染病根部组织分离和提纯根肿休眠孢子.众多因素可以影响提纯休眠孢子的纯度,为了得到更高纯度和均匀度的休眠孢子的优化方法,我们对一系列影响因素如超声波破碎功率、pH、孢子破碎浓度、处理时间和不同的水溶物质等进行了研究.在pH值5.5左右、添加0.5%的二甲基亚砜、孢子浓度约为7×108、345W功率下超声波处理10min条件下获得了最优数量和均匀度的孢子,杂菌数量减少了51%以上,杂菌种类减少超过75%.超声波处理50min后,孢子破碎率稳定地达到90%以上,除菌率达99%以上.用此方法能在较短时间内获得高纯度和高均匀度的休眠孢子,为休眠孢子的深入研究提供了资料.图4表3参10     

岩豆凝集素分子中色氨酸残基的化学修饰及其荧光光谱研究

从岩豆（Ｍｉｌｌｅｔｔｉａ ｄｉｅｌｓｉａｎａ Ｈａｒｍｓ ｅｘ Ｄｉｅｌｓ）种妇中分离纯化得到的岩豆凝集素（简称ＭＤＬ）经链霉蛋白酶水解,测得其分子中含有４个色氨酸（Ｔｒｐ）残基。用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）对ＭＤＬ分子中的色氨酸残基进行化学修饰,在无变性剂存在下有３．６个Ｔｒｐ残基被修饰,在变性条件下可修饰３．８个Ｔｒｐ残基。修饰后ＭＤＬ活性均丧失,且甘露糖对ＭＤＬ活性雎有保护作用。表明Ｔｒ