应用高效离子交换色谱分析青枯菌的致病力分

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪检测器对不同致病力的青枯菌进行分析,建立了一种快速检测青枯菌致病力分化的新方法青枯菌纯培养物经过高效离子交换色谱分离得到3个致病力不同的特征峰,大小依次为峰3组分>峰2组分>峰1组分.对10株青枯菌进行色谱分析,并结合番茄组培苗感染试验检测其致病力,结果发现,强致病力菌株经过色谱分离只在峰3的保留时间位置出现单一特征峰,在9 d内即可引起100%的番茄组培苗发病;若菌株经过色谱分离形成3个特征峰,则峰3所占的面积比越大,该菌株的致病性相对就越强.25株不同致病力青枯菌的验证试验表明了该方法的可行性,番茄组培苗发病率x与峰3面积比y之间呈现出良好的线性关系,回归方程y=0.9581x+5.4984,相关系数r=0.986.通过对青枯菌色谱行为、致病力、细胞表而黏附的EPS Ⅰ含量三者之间相互关系的进一步研究,发现青枯菌的致病力越强,则细胞表面黏附的EPSⅠ越多,峰3所占的面积比就越大.图3表6参15     

采用高效离子交换色谱分离分析动物肠道菌群方法初探

报道了利用高效离子交换色谱直接分离动物粪便肠道菌群的有关研究结果.人与兔的粪便样品稀释后经离心分离岀细菌,通过DEAE弱阴离子交换色谱(30cm×2cmi.d)进一步除去杂物,将所得细菌的完整细胞样品直接上样高效液相阴离子交换色谱进行分离.色谱柱采用TSKgelSuperQ-TOYOPEARL650C强阴离子交换树脂,平衡缓冲液为0.02mol/L的哌嗪-HCl缓冲液(pH8.0),吸附于色谱柱上的细菌完整细胞用0～1mol/LNaCl线性梯度进行洗脱,洗岀液由260nm紫外吸收与光散射强度检测器检测.人与兔粪便细菌样品分别获得8个与5个组分,经镜检与培养实验确认为细菌,并且光散射仪洗脱峰峰面积同细菌计数结果具有线性相关性.实验表明,高效离子交换色谱能够应用于肠道菌群这样的复杂细菌体系的分离分析.图5表2参11     

Waters新型Symmetry^TM液相色谱柱在环境分析中的应用

在环境样品分析中,往往样品母体复杂,干扰物多,而被测组分含量低,给液相色谱分离带来很大困难.从事环境样品分析的色谱工作者对色谱柱的要求是:分析低微含量组分时,要求峰形好,定量准确,灵敏度高.分析色谱保留行为不好的组分时(如碱性化合物的峰拖尾现象),要求峰形对称性好,重现性高.开发新的分析方法,要求流动相的组成尽量简单.要求色谱柱质量长期稳定,批间重现性高.Waters公司最新推出全新标准的Symmetry~(TM)对称性液相色谱柱,充分考虑了色谱工作者对色谱柱的要求,使您的分离工作更有效、更完善.     

小麦叶片表面蜡质及其与品种抗蚜性的关系

建立了一套适宜小麦表面蜡质的提取和气相色谱-质谱联用(GC-MS)分离和鉴定的方法,测定了16种不同小麦品种的叶表蜡质成分,初步分析了不同抗虫品种及不同生育期各组分的变化动态与趋势.从小麦表面蜡质的提取物中分离和鉴定出30余种化合物,为9种烷烃、7种脂肪醇、10种脂肪酸、2种醛和2种酮;并以GC-MS进行组分鉴定,以峰面积值为指标,定量计算和比较表面蜡质各组分的含量,其中主要成分是脂肪醇,占68.1%,仅C28醇就占分离物质总量的50.14%,其次为烷烃, 再次为脂肪酸和醛,酮含量最低.抗蚜与感蚜小麦品种表面蜡质的组成变化不大,但大多数组分的含量差异明显,其中醇、酸和醛的含量均有随小麦品种抗蚜性增强而升高的趋势;不同生育期,小麦表面蜡质各组分的含量也存在明显差异,在小麦孕穗-抽穗期,抗蚜小麦品种中C28醇、C30醇及总醇的含量高于感蚜小麦品种.室内、田间小麦苗期及孕穗-抽穗期表面蜡质中的C28醇, C28酸、C18酸、C18烯酸, C26醛、C28醛的含量则随抗性增加而升高.研究结果可为进一步开展小麦表面蜡质单一组分对麦蚜寄主选择和抗蚜作用影响研究奠定基础.图4表1参33     

黄芪多糖的提取及按相对分子质量分段分离

黄芪多糖(APS)具有多种生物活性以及广泛的临床应用,然而目前对其研究大多以相对分子质量(Mr)范围分布较大的总多糖为对象,使得药理活性机制等研究难于深入.采用常温渗滤方法提取黄芪多糖,粗多糖得率为15.92%,多糖含量为82.43%,较传统水煮醇沉法有较大提高;对提取的粗多糖用离子交换层析进行纯化、用分步醇沉联合凝胶层析进行分段分离,获得7个多糖组分,经高效液相色谱(HPLC)测定,分离的7个组分皆为均一组分,高效凝胶渗透色谱(HPGPC)测定证明该7个组分具有不同的Mr,其范围分布在1.4×103～157.7×103,为进一步研究黄芪多糖活性提供了良好的材料.     

活性污泥胞外聚合物的分层组分及溶解性微生物代谢产物的特性

提取了活性污泥胞外聚合物(EPS)和溶解性微生物代谢产物(SMP),并按EPS的紧密程度对松散EPS、紧密EPS的分层组分以及SMP属性进行了分析鉴定.结果表明,以葡萄糖为基质时,松散EPS的主要组成是多糖,紧密EPS的主要组成是蛋白质,而SMP主要由腐殖质类物质构成.SMP、松散EPS、紧密EPS和总样EPS的三维荧光图谱显示其只有类色氨酸峰和类腐殖酸峰,其类腐殖酸峰主要是由生物代谢产生的腐殖质组成.大分子量腐殖质类物质在几种组分中均出现,但是具有腐殖质特性的分子量为8500 Da的组分会在SMP中大量生成,而具有腐殖质特性的分子量为400 Da的组分只存在于EPS的紧密层中,这与微生物对这3种物质的生物可利用性有关.     

青枯菌野生型菌株和无毒突变株细胞表面的吸附特性(英文)

应用高效离子交换色谱和激光光散射仪检测器(HPLC/MALLS)研究青枯菌野生型菌株79#和无毒突变菌株RS52’对强阴离子交换树脂(SuperQ-650C)的吸附特性.结果显示,这2个菌株在色谱行为和吸附特性方面差异显著.静态吸附试验结果也表明,在相同条件下,79#菌株的吸附速率和吸附量与RS52’菌株不同,79#菌株在60min达到吸附平衡,最大吸附量为1.09×109cfu/g(干树脂);RS52’菌株在120min达到吸附平衡,最大吸附量为2.10×10~9cfu/g(干树脂).进一步采用Langmuir和Freundlich吸附等温线方程比较79#菌株和RS52’菌株与树脂之间的吸附能力,研究结果与静态吸附试验结果以及高效离子交换色谱的分析结果相一致,RS52’菌株与树脂之间显示出更强的吸附力;此外,用Freundlich方程拟合的效果优于Langmuir方程,拟合的曲线与实验数据更吻合.图4表2参16     

莱茵衣藻胞外聚合物的提取和红外光谱表征

胞外聚合物(EPS)是微生物细胞代谢过程中产生的高分子物质,其中的多种官能团通过络合、转化等反应改变周围环境的元素形态和活性,在污染生物修复中具有应用前景.以模式微藻——莱茵衣藻为研究材料,采用加热法、NaOH法、EDTA法、阳离子交换树脂(CER)法、高速离心法提取莱茵衣藻的EPS,比较分析每种方法得到的EPS的含量及其组成成分,并结合LIVE/DEAD BacLight染色和激光共聚焦显微镜观察细胞活性,以确定莱茵衣藻EPS最适宜的提取方法.结果表明,不同提取方法得到的EPS各组分含量有显著差异,5种方法的提取总量依次为NaOH法加热法CER法EDTA法离心法.荧光染色和激光共聚焦显微镜检测结果表明,相对于NaOH法,加热法对微藻细胞的破坏程度较小,且傅里叶红外光谱分析结果表明,加热法提取的EPS出现N-H、C=O或C-N(蛋白质)和C-H、C-O-C、RHC(OH)(OR)(糖类)等吸收峰.本研究表明加热法是莱茵衣藻EPS的最适宜提取方法,EPS的官能团信息sk可为后续研究莱茵衣藻EPS与重金属之间的相互作用奠定基础.     

沃特世推出涵盖纳升级至微升级的超高效液相色谱系统——ACQUITY UPLC M-Class

正沃特世公司推出了新型的WatersACQUITY UPLCM-Class系统,这是首台涵盖纳升级至微升级的UltraPerformance LC(UPLC)超高效液相色谱系统,系统耐压高达15000 psi.将此系统与沃特世质谱仪联用,能够对复杂样品体系中含量极低的分子进行鉴定和定量,提供前所未有的高灵敏度.ACQUITY UPLC M-Class系统可用于蛋白质组学、代谢分析、代谢物鉴定和药代动力学研究等各个领域.同时,全新设计的可耐受15000 psi压力的亚2μm色谱柱,提供更快的分离速度、更高的峰容量和灵敏度.     

沃特世超高效合相色谱系统首次亮相中国

沃特世（Waters）公司在慕尼黑上海分析生化展（analytica China）推出最新技术的Waters ACQUITY UPC2TM系统,它是分离科学仪器的一个新类别.利用超高效合相色谱（UPC2）的工作原理,沃特世ACQUITY UPC2系统作为正交分离技术的补充用于解决复杂的色谱问题,尤其适用于处理极性各异的样品．任何使用液相色谱或气相色谱的实验室,将因在其分析技术中增加合相色谱而受益．     

动物细胞的简单控制模型

动物细胞的体外培养需要多种生长因子。本研究假设Ｖｅｒｏ细胞生长和对营养物的吸收利用与一个关键生长密切相关，一个控制变量ｃ控制这一关键生长因子的合成。根据这假设建立了一个简单的Ｖｅｒｏ细胞生长的控制模型，该模型较好地描述了细胞从延迟期到静止期的整个生长过程。     

谷氨酰胺对鲑鱼胚胎(CHSE)细胞生长和代谢的影响

鉴于鱼类和哺乳动物的谷氨酰胺代谢途径有所不同，为了优化CHSE细胞的培养基和大量培养的过程控制。考察了谷氨酰胺对CHSE细胞生长和代谢的影响．在CHSE细胞批培养中，无谷氨酰胺的M199培养基可以支持CHSE细胞的生长，当初始谷氨酰胺浓度c=0．54mmolL^-1时，细胞可达到最高密度nmax／10^5mL^-1=16．19；而更高浓度的谷氨酰胺(c：1．76-5．62mmolL^-1)对细胞生长有抑制作用．在c=0～5．62mmolL^-1初始谷氨酰胺浓度的批培养中，葡萄糖的利用和乳酸的生成基本一致，随谷氨酰胺浓度的升高，Qglc和Qlac增加，Yn/glc降低．另外，随着初始谷氨酰胺浓度的增加(c=0～3．33mmolL^-1)，谷氨酰胺的消耗增加，Yn/gln和Yammo／gln分别下降58％和50％；当初始谷氨酰胺浓度继续增加时，谷氨酰胺的消耗、Yn/gla和Yammo/gln基本不变．此外，当初始谷氨酰胺浓度为0时，丙氨酸成为消耗性的氨基酸；Yala/gln先随初始谷氨酰胺浓度的增加(c=0．54～1．76mmolL^-1)而增加，而后又随初始谷氨酰胺浓度的增加(c=1．76～3．33mmolL^-1)而降低．最后维持不变．图4表3参16     

利用彗星实验检测丙烯酰胺对小鼠两种细胞的DNA损伤和修复

为了研究丙烯酰胺致小鼠睾丸细胞和外周血淋巴细胞DNA的损伤及修复情况,同时比较这两种细胞对丙烯酰胺的敏感性,将雄性昆明种小鼠一次性腹腔注射丙烯酰胺(50mg·kg-1(bw)),在暴露后第1、2、4、6、8、10、12d,分别对其睾丸组织细胞和外周血淋巴细胞DNA损伤进行彗星实验分析.结果表明,暴露结束后每个时间点小鼠睾丸组织细胞、外周血淋巴细胞DNA的迁移率均显著高于阴性对照组,随时间推移两种细胞DNA迁移距离逐渐降低,同一时间点睾丸组织细胞DNA损伤较外周血淋巴细胞DNA损伤更为严重,两者差异显著(p<0.05).以上结果表明,睾丸组织和外周血淋巴细胞可能是丙烯酰胺的作用位点;机体对丙烯酰胺造成的遗传损伤有一定的修复能力;与淋巴细胞相比,睾丸细胞对丙烯酰胺导致的遗传损伤更为敏感.     

雨生红球藻不同形态细胞的超微结构研究

应用透射电镜观察比较雨生红球藻不同形态细胞的超微结构，结果表明，游动细胞除具有典型的绿藻门团藻目的特征性结构外，细胞壁与原生质体分离形成周质空间，细胞具有发达的可进一步发育的网状叶绿体，不动细胞除了无鞭毛，具厚壁外，它与游动细胞的主要不同是：细胞内的大部分区域被色素沉积物占据，叶绿体等细胞器被包裹，光合片层紧贴，早期的不动细胞还具有较大的线粒体，根据形态及超微结构上的差异，对红球藻游动细胞与不动细胞间的生理差异进行了解释。     

Efficient production of hydrogen peroxide in microbial reverse-electrodialysis cells coupled with thermolytic solutions

● Appreciable H₂O₂ production rate was achieved in MRCs utilizing NH₄HCO₃ solutions. ● Carbon black outperformed activated carbon as the catalyst for H₂O₂ production. ● The optimum carbon black loading for H₂O₂ production on air-cathode was 10 mg/cm². ● The optimum number of cell pairs was determined to be three. ● A maximum power density of 980 mW/m² was produced by MRCs with 5 cell pairs. H₂O₂ was produced at an appreciable rate in microbial reverse-electrodialysis cells (MRCs) coupled with thermolytic solutions, which can simultaneously capture waste heat as electrical energy. To determine the optimal cathode and membrane stack configurations for H₂O₂ production, different catalysts, catalyst loadings and numbers of membrane cell pairs were tested. Carbon black (CB) outperformed activated carbon (AC) for H₂O₂ production, although AC showed higher catalytic activity for oxygen reduction. The optimum CB loading was 10 mg/cm² in terms of both the H₂O₂ production rate and power production. The optimum number of cell pairs was determined to be three based on a tradeoff between H₂O₂ production and capital costs. A H₂O₂ production rate as high as 0.99 ± 0.10 mmol/(L·h) was achieved with 10 mg/cm² CB loading and 3 cell pairs, where the H₂O₂ recovery efficiency was 52 ± 2% and the maximum power density was 780 ± 37 mW/m². Increasing the number of cell pairs to five resulted in an increase in maximum power density (980 ± 21 mW/m²) but showed limited effects on H₂O₂ production. These results indicated that MRCs can be an efficient method for sustainable H₂O₂ production.     

2,3,7,8-TCDD的短期暴露对HepG2肝癌细胞内小分子代谢产物的影响

为了研究二恶英对细胞的代谢毒性,探究其肝毒性的作用机制,以二恶英中毒性最强的2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二恶英(TCDD)为代表污染物,以HepG2肝癌细胞为受试对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和高效液相色谱/串联质谱法考察了TC-DD的24h暴露对HepG2细胞的增殖活性以及细胞的葡萄糖、氨基酸、尿素和甘油等小分子代谢物的影响。结果显示,短暂的TCDD暴露对HepG2细胞的增殖活性无显著影响。24h的TCDD暴露对细胞的葡萄糖消耗量无显著影响,但当TCDD浓度增至1nmol·L-1时,葡萄糖的消耗量表现出一定的降低趋势。0.01nmol·L-1TCDD就会使细胞脯氨酸和谷氨酸的合成能力下降,且谷氨酸的变化表现出明显的剂量-效应关系;TCDD可刺激细胞对缬氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸以及亮氨酸与异亮氨酸的吸收,并具有明显的浓度依赖性。随着TCDD浓度的增加,甘油和尿素产生量的降低趋势逐渐明显,1nmol·L-1TCDD处理24h后,甘油和尿素的产生量仅为对照组的1%和18%。研究表明,TCDD在短时间内使HepG2细胞内的一系列小分子代谢产物发生了不同程度的改变,且呈现出一定的剂量-效应关系。可见,TCDD可通过干扰HepG2肝癌细胞的代谢过程产生毒性。     

蔓茎堇菜细胞悬浮培养的研究

对蔓茎堇菜细胞悬浮培养的条件进行了选择，并测定悬浮培养的生长动态。结果表明：蔓茎堇菜细胞悬浮培养的最适接种量为２．０～３．５ｇ（５０ｍＬ）；最适培养基为ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＺＴ＋３００ｍｇ／Ｌ ＬＨ＋２００ｇ／Ｌ蔗糖（或葡萄糖），ｐＨ５．８；细胞悬浮培养一个周期过程中细胞数目增长的动态基本上是一条Ｓ型曲线，对数生长期明显；细胞鲜重（ｍＦＷ）和细胞干重（ｍＤＷ）则与细胞     

Uptake of cadmium into cells in culture∗

Cadmium has been recognized as pollutant of the environment for many years and numerous studies on its toxic effects have been carried out. Little, however, is known about its metabolic behaviour e.g. why the metal is accumulated so extremely rapidly into the organs of men and animals. Since the study of the individual metabolic steps is very difficult in vivo cell cultures may be used to obtain first indications of what happens in the whole animal.

We used CHO cells in monolayer culture to study the conditions under which the uptake of cadmium occurs. From serumfree medium the metal is accumulated rapidly in the cells. The uptake is inhibited very strongly by the presence of serum or albumin. Accumulation occurs against a concentration gradient and is dependent on the incubation temperature. Below 10°C no cadmium uptake is seen. Several substances which are known to affect cell metabolism have been used to influence cadmium accumulation. Neither inhibitors of energy production nor microtubule or microfilament disruptors showed any substantial effect. In contrast SH‐group blocking agents markedly reduced cadmium uptake.

The results show that cadmium uptake does not occur by passive diffusion but by some active mechanism.     

邻苯二甲酸二乙基己酯（DEHP）对金鲫鱼脑细胞DNA的损伤

为了研究邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对金鲫鱼(Carassius auratu)脑细胞DNA的损伤作用,采用不同浓度的DEHP溶液(0、25、50、100、200mg·L-1)对体外培养脑细胞进行染毒,应用单细胞凝胶电泳(彗星实验)检测脑细胞DNA的损伤效应.结果表明,染毒1.5h后,与对照组相比,DEHP各染毒组细胞尾部DNA百分率(Tail DNA%)和尾矩(Tail Moment)均显著升高(p<0.01),即DEHP染毒引起了脑细胞DNA的严重断裂;随着DEHP浓度的增加,DNA损伤程度加剧,细胞尾部DNA百分率及尾距与DEHP染毒浓度呈明显的剂量-效应关系.以上结果表明,DEHP可导致金鲫鱼脑细胞DNA损伤。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒理作用研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是人畜食品中检出率和超标率最高的一种真菌毒素。与核糖体60s亚基的肽基转移酶活性中心结合后会引发核糖体应激反应,诱导细胞凋亡等作用,对肠道、免疫系统造成破坏,并且具有遗传毒性。为今后的研究工作提供参考,笔者将从DON的毒理学机制和对机体的影响角度入手对近几年新的研究成果做综合论述。