具有抑菌促生作用的植物内生细菌的筛选

从168株分离自茄科作物体内的对黄瓜枯萎病菌或番茄青枯病菌有拮抗作用的细菌中，筛选出19株对辣椒疫病菌有较好拮抗作用的菌株，其中2号、13号、20号、TL6、TMS2、TB2和QEL17个菌株对以上3种病原菌都有一定的拮抗作用．从拮抗辣椒疫病菌的菌株中筛选出20号、22号、TL6、TB1、TB2和EPL8共6株对番茄有较好促生作用，对辣椒采后果实疫病有一定控制效果，且能进入番茄和辣椒体内的菌株．试验结果表明，防病作用最佳的TB2菌株菌液喷雾处理后接种病菌，4～10d防治辣椒采后果实疫病的效果达55．56％～100％；促生作用最佳的TB1菌株可使番茄苗鲜重增长105．84％，干重增长66．25％．经鉴定，6株有抑菌、促生的内生细菌均为芽孢杆菌(Bacillus sp．)，其中EPL8和22号菌株鉴定为枯草芽孢杆菌(B．subtilis)．表5参8     

紫色土硅酸盐细菌的表型特征及溶磷解钾能力

对40株分离自四川、重庆等地的代表笥紫色土中的硅酸盐细菌和1株参照菌株进行了52个表型性状的数值分析，探讨了硅酸盐细菌液体振荡培养后pH值、菌数变化与溶磷、解钾量之间的关系，结果表明：紫色土硅酸盐细菌绝大部分属于胶胨样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），但在个体和群体生长特征、碳氮源利用、硝酸盐还原能力、耐Ⅰ菌株在86％相似水平分为2个亚群，不同的硅酸盐细菌菌株的溶磷、解钾特性差异较大，具有溶磷解钾双重特性的菌株约占供试菌株（含参考菌株）的22％，只具溶磷特性的约占29％,其溶磷效果较显著（有效磷增加最高达40.64%），而解钾效果不明显（有效钾增加最多的只有7.9%）。供试紫色土硅酸盐细菌的溶磷、解钾特性与菌株生长过程中产酸有关，其溶磷、解钾量与培养液中pH值的降低呈正相关，图5表3参20。     

家畜沤肥浸渍液对青椒枯萎病的防治及作用机理

研究表明家畜沤肥浸渍液对青枯萎病具有显著防治效果，其中猪粪沤肥浸液在温室盆栽的防治效果为88．5％，马粪、牛粪沤肥浸渍液在温室盆栽的防治效果分别为56．6％和65．5％，作用机理研究结果表明，①三种沤肥浸渍液对青椒枯萎病菌的厚坦孢子、小孢子都具有强烈的溶菌作用。②沤肥微生物中具有对青椒枯萎病菌有强烈的拮抗作用的细菌。③沤肥浸渍液处理青椒后，β－1，3－葡聚糖酶，多酚氧化酶，苯丙氨酸转氨酶活性分别增高12．0％、367．0％和20．0％。④沤肥浸渍液处理青椒后，其植株高度、叶片厚度和叶脉直径均比对照有所增高。显示防病机理既有拮抗作用，又有诱导抗性作用。表5参12     

河南省不同类型土壤可培养放线菌多样性及拮抗活性菌株筛选

分别从河南省濮阳、南阳、信阳、三门峡和商丘等地区采集潮土、黄棕壤、水稻土、褐土、盐碱土等土壤样品45份,采用8种不同的分离培养基对土壤放线菌进行分离和培养;通过16S rRNA基因序列分析对可培养放线菌进行分类鉴定;以7种植物病原菌为靶标,通过对峙培养筛选拮抗活性菌株,并对具有拮抗活性菌株的次级代谢产物合成相关基因进行初步筛查.结果表明,从5种类型土壤中分离得到放线菌分离物955株,分布于放线菌门的10个目12个科17个属,包含626个物种,其中9个分离物为潜在的新种;分离物中链霉菌属菌株751株,占分离菌株的78.64%,为最主要的优势菌属,稀有放线菌204株,占21.36%;不同类型土壤放线菌的分离频率存在一定的差异,其中褐土分离的放线菌数量最多,水稻土的分离数量最少,但是各类型土壤分离的可培养放线菌在属水平上差异不大;筛选获得对植物病原菌有拮抗活性的菌株392株,占总分离物的41%,其中链霉菌332株,占总拮抗活性菌株的84.7%,稀有放线菌60株,占总拮抗活性菌株的15.3%,且多数活性菌株含有多种生物活性物质合成相关的功能基因.由此可见,河南省土壤放线菌多样性丰富,并蕴藏丰富的稀有放线菌和拮抗活性放线菌资源,具有发掘放线菌新物种和新活性化合物的潜力.(图4表6参33附表1)     

蔬菜灰霉病生防菌的筛选与防效试验初报

针对灰霉病对大棚蔬菜生产造成的严重危害,从不同生态环境条件下筛选到４种对灰霉病菌（由Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ引起）有拮抗作用的生防菌株,并进行了初步鉴定．室内和田间试验表明,４种生防菌株中尤以绿色木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｖｉｒｉｄｅ）ＬＴＲ２的防治效果为最佳,达到了８０％以上     

一株草莓根腐尖孢镰刀菌拮抗内生细菌的分离鉴定及抑菌特性

为筛选对草莓根腐尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)有较好抑菌活性的草莓内生细菌,从草莓的根、茎、叶和果实中分离内生细菌,采用平板对峙法筛选具有抑菌活性的菌株,经形态特征观察、生理生化特性及分子鉴定后,进行拮抗菌抑菌特性分析.结果筛选到1株对草莓根腐尖孢镰刀菌具有较高抑菌活性(抑菌带达9.8 mm)、稳定性较好的菌,标记为SY-4.此外,该菌对桃褐腐病菌(Monilinia fruticola)、棉花红腐病菌(Fusarium moniliforme)和草莓根腐石楠拟盘多毛孢(Pestalotiopsis photiniae)等也有较好的拮抗作用.SY-4经鉴定确定为枯草芽胞杆菌.SY-4发酵液在培养时间48 h、培养温度37℃、pH值为7时,抗菌效果最好,但发酵产物不耐高温、不耐酸、较耐碱性,对蛋白酶敏感,初步说明存在蛋白类抑菌活性物质.电镜观察发现SY-4发酵液处理草莓根腐尖孢镰刀菌后,菌丝形态变得不规则.该拮抗内生细菌是潜在的植物病原真菌生防菌资源,具有一定的开发与应用价值.     

拮抗菌对黄瓜枯萎病菌的室内生物活性

测定了从沤肥浸渍液和土壤中分离并筛选得到对黄瓜枯萎病菌的室内生物活性的6个菌株，编号为94－I、94－Ⅱ、94－Ⅲ、96－Ⅰ和98－Ⅱ，测定其孢子悬浮培养16h时对黄瓜枯萎菌的抑制率分别为48．29％、0．00％、60．69％、39．28％、61．29％和72．32％，孢子和菌丝有的变畸形并产生大泡囊；平皿拮抗试验表明，其活体浓度为50％时对黄瓜枯萎病菌的抑制率最大分别为74．52％、83．27％、90．60％、88．59％、89．35％和94．30％；而其相同浓度高压蒸汽灭活后的代谢产物对黄瓜枯萎病菌的抑制率最大分别为33．215、52．22％、62．84％、46．57％、47．61％和70．34％。     

土壤中耐砷细菌的筛选和砷还原基因多样性分析

采用琼脂平板培养法从湖南富砷土壤中筛选出43株耐砷细菌。16SrRNA序列分析结果表明所筛选菌分属于四个门：Actinobacteria、Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes,其中71．1％为革兰氏阳性菌。通过PCR和克隆测序等方法检测耐砷菌的砷还原相关基因（arrA、arsC、arsB／ACR3）及其基因多样性。检测结果显示：43株菌中,6．9％含异化砷还原基因arrA,30．2％含细胞质砷还原基因arsC,27．9％含As（Ⅲ）运载蛋白基因arsB／ACR3,这些基因在细菌中的出现频率较低。通过Mega软件构建系统发育树发现arrA基因的多样性可能受一定的地域差异影响,arsC基因在一些菌株中存在着基因水平转移现象,同时表明a变形菌可能更倾向于拥有Acr3型As（Ⅲ）载体蛋白,而arsB则多出现在芽孢杆菌中。     

青海高原土壤拮抗性放线菌的生态分布

采用琼脂块法测定了分离自青海高原不同生态环境下的 1 007株代表性放线菌的拮抗性.结果表明:①供试菌中对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假丝酵母、青霉、辣椒疫霉、西瓜枯萎菌、棉花枯萎菌及黄瓜枯萎菌有拮抗性的放线菌占供试菌总数的比率分别为 9. 1%、27. 2%、2. 1%、2. 6%、13. 8%、10. 1%、7. 1%及 7. 4%;在青海高原(西部)土壤的拮抗性放线菌中,抗细菌放线菌多于抗真菌放线菌,抗G+细菌的放线菌多于抗G-细菌放线菌,抗丝状真菌放线菌多于抗单细胞真菌放线菌.②耕作土壤中,拮抗性放线菌株数占放线菌总株数的百分率 (拮抗菌百分率 )是自然土壤的3. 5倍,且耕作土壤拮抗菌百分率按菜地(71. 7% ) >粮田(40. 6% ) >绿肥地(32. 8% ) >果园(25. 0% )的顺序排列.旱地土壤拮抗菌百分率明显高于水地.③不同类型土壤拮抗菌百分率均不同,且不同类型土壤拮抗菌百分率按黑钙土>栗钙土>灰钙土>砂土的顺序排列.④拮抗性放线菌的数量、拮抗菌百分率与土壤有机质、全氮、碱解氮、全磷及磷酸酶活性有关.其中有机质和全氮与拮抗性放线菌株数和拮抗菌百分率的相关性达极显著水平 (P<0. 01).抗细菌与抗真菌拮抗性放线菌的出现频率与土壤有机质、全氮及放线菌总数量的相关性分别达到了极显著(P<0. 01)与显著水平(P<0. 05),且土     

石油降解菌的分离、鉴定及其降解能力的研究

从含油污泥中,筛选出能以２０ ＃ 机械润滑油为唯一碳源的３ 株石油降解菌菌株,经鉴定分别为动胶菌属（ Ｚｏｏｇｌｏｅａ ｓｐ ．） 、氮单胞菌属（ Ａｚｏｍｏｎａｓｓｐ ．） 和假单胞菌属（ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ ．） ．通过其降解能力的测试,以动胶菌 Ｄ２ 菌株对２０ ＃ 机油的降解能力最强：在含油浓度ρ＝ ５００ ～１ ５００ ｍｇ／ Ｌ 的摇瓶试验中,其除油率为２０ ．８ ％ ～２５ ％ ．利用动胶菌 Ｄ２ 菌株进行生物接触氧化法处理含油废水模拟试验,当入流浓度为１ ０００ ｍｇ／ Ｌ 时,除油率可达９０ ．５ ％ ～１００ ％ ．这一结果表明,动胶菌 Ｄ２ 菌株生物接触氧化法处理含油废水具有很好的应用前景     

不同土壤胶质芽孢杆菌生理生化特征及其解钾活性

利用土壤矿物为K源的硅酸盐细菌选择性培养基,从我国部分省市土壤中筛选到30株胶质芽孢杆菌Bacillus muci-laginosus,以辽宁菌种保藏中心胶质芽孢杆菌LICC10201(编号K31)为参照菌株,对其生理生化特性、耐盐性、耐酸碱性、温度敏感性及解K能力等生物学特性进行了测定.结果表明,30株胶质芽孢杆菌菌体均为杆状,产生椭圆至圆形芽孢.其中K3、K9、K19、K31为短杆状,30株菌株均为G~-.NH_4~+、NO_3~-为良好N源,且能在无N培养基上生长.菌株K5、K12和K31解K能力较强,释放的K比不加菌液对照分别增加2.39倍、2.28和2.27倍;K5、K11、K26、K31在w=3%NaCl的培养基上能生长;在25～30℃范围内供试胶质芽孢杆菌均能良好生长;以上试验数据可为将来微生物肥料的研制提供必要的依据.     

蜡状芽孢杆菌不同菌株降解有机磷农药的特性分析

筛选分离降解微生物解决有机磷农药残留给水体和土壤环境带来的污染问题是一项可行的生物修复技术。采用富集培养和定时取样分析有机磷农药残留的方法,分离驯化出三株能够降解有机磷农药的细菌,研究了其形态特征和生理生化特性并对其16SrDNA序列进行了分析,同时比较了三菌株对甲基对硫磷（Methyl－parathion）、毒死蜱（Chlorpyrifos）和_二唑磷（Triazophos）的降解特性。结果表明：通过富集培养得到10菌株具有降解甲基对硫磷和毒死蜱的能力,比较确定HY-1、HY-2和HY-4三菌株作为研究对象,经鉴定为蜡状芽孢杆菌（Bacilluscereus）的不同菌株,三菌株在Genbank上的登录号分别为：eu915687、eu915686和eu915688。在甲基对硫磷质量浓度为50mg·L-1时,三菌株72h的降解率分别为91．7％、87．7％与92．4％．降解率无显著性差异（P〉0．05）,当甲基对硫磷质量浓度增加到100mg·L-1时,三菌株对甲基对硫磷的降解率有所下降,其中HY-2对甲基对硫磷的降解率下降最大达23％,且和其他两菌株有显著性差异（P〈0．05o三菌株72h对100mg·L-1毒死蜱的降解率分别达到64．8％、53．7％和56．5％,在不同的毒死蜱初始质量浓度下,HY-1和HY-4两菌株对毒死蜱的降解率无显著性差异（P〉0．05）,HY-2与HY-1、HY-4两菌株有显著性差异（P〈0．05o三菌株对三唑磷的降解率均较低,其中HY-2对初始质量浓度为100mg·L-1三唑磷的降解率最高仅为20．7％,其余两菌株对三唑磷的降解率比HY-2低且无显著性差异（P〉0．05o可以得出本研究分离得到的蜡状芽孢杆菌不同菌株对有机磷农药的降解存在多态性。     

产表面活性剂降解石油菌株产物性质及降解性能研究

微生物是组成生态系统的重要成员,在污染物去除中发挥着重要作用,是生物修复中的主力,然而在石油污染修复过程中,石油烃的疏水性会限制微生物对石油的降解,但一些微生物的细胞代谢物即生物表面活性剂,它是微生物在一定条件下代谢分泌产生的具有一定表面活性,集亲水基和疏水基结构于一分子的两亲性化合物,可以促进油的乳化,提高油的分散程度,增大菌株和油珠的接触机会,促进对石油烃的吸收和降解。在实验室分离得到了7株产表面活性剂石油降解菌株,经分子鉴定可知菌1和菌2都为粘质沙雷氏菌Serratia marcescens,菌3为居植物柔武氏菌Raoultella planticola,菌4,菌6和菌7都为克雷伯氏菌Klebsiella variicola,菌5为蜡状芽孢杆菌Bacillus cereus。主要研究了它们的生长与表面活性剂物质分泌状况的关系,发现随着时间增加,OD值随之增大,表面张力呈现下降趋势;并对菌株产物进行提取和薄层层析,离子型分析和红外光谱分析,初步判断其产物均为阴离子糖脂类;通过pH,初始油质量浓度,接种量和盐度4个单因素的变化研究菌1粘质沙雷氏菌,菌3居植物柔武士菌,菌5蜡状芽孢杆菌和菌6克雷伯氏菌对石油类物质降解能力,发现菌3居植物柔武氏菌和菌5蜡状芽孢杆菌降解性能较好;通过响应曲面法优化蜡状芽孢杆菌的降解条件,得出其最佳降解条件为pH为5.02,油质量浓度为3 g·L-1,接种量为1199.98μL,盐度为0.5 g·L-1时,在此条件下,菌株对石油的降解率为66.94%。     

不同补给水源的城市人工湖中异养菌耐药性及耐药菌种属分布研究

为了阐明不同补给水源的城市人工湖中异养菌耐药状况和耐药菌种属分布特征,选取分别以地表水和再生水为补水来源的XQ湖和FQ湖为代表进行研究。从2018年4—11月逐月采集水样,考察了各水样中对氨苄西林(AMP)、磺胺甲恶唑(SMZ)和四环素(TET)这3种不同种类抗生素具有耐药性的异养菌含量,并对分离菌株的耐药表型、耐药菌株的种属分布以及水质理化指标进行了分析。结果表明,2处人工湖中的AMP耐药菌和SMZ耐药菌含量约为10~2～10~4CFU·(100 m L)~(-1),而TET耐药菌含量则约10~1～10~3CFU·(100 m L)~(-1)。分离出的84株耐药菌归属于19个种,其中蜡状芽孢杆菌、大肠埃希氏菌、维氏气单胞菌、豚鼠气单胞菌和鸟氨酸拉乌尔菌为2个湖共有耐药菌。71.4%的耐药菌都是对AMP单一耐药,以蜡状芽孢杆菌为主。由于具有固有耐药性的细菌在分离出的耐药菌中占比很低,获得性耐药很可能在城市人工湖中异养菌耐药性的发展上发挥了主要贡献作用。地表水补水的XQ湖和再生水补水的FQ湖在总异养菌含量、耐药菌含量和检出率上均无显著差异。分离来源对16株耐药性气单胞菌的聚类无明显影响。     

Effect of natural preservatives on the growth of histamine producing bacteria

Present study deals with the hampering of the growth of histamine producing bacteria (HPB), by using NaCl and spices which are easily available and cheaper cost wise. For this experiment, four strains of HPB viz. Vibrio parahaemolyticus, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa and Proteus mirabilis were tested against 1 to 10% concentrations of NaCl and 1 to 5% concentrations of natural preservatives (turmeric, ginger and garlic) in a basal medium. HPB showed different growth rates at different concentrations of NaCl and natural preservatives. V. parahaemolyticus, B. cereus and Ps. aeruginosa showed no growth at 10% concentration. When the HPB growth was tested with garlic, turmeric and ginger extracts, growth of all the bacteria was inhibited by garlic and turmeric extracts at 5% concentration. In ginger, V. parahaemolyticus, B. cereus and P. mirabilis were totally inhibited at 5% concentration. But Ps. aeruginosa showed very less growth at this concentration.     

新疆罗布泊外围地区极端环境嗜碱放线菌生物学特性及活性物质筛选

2006～2007年从新疆罗布泊外嗣地区的泥土样品中分离了117株放线菌,初步筛选后对其中47株嗜碱放线菌进行了形态学鉴定,不同生长条件(pH值,盐NaCl、KCl、MgCl_2,碱性物质Na_2 CO_3、K_2CO_3、Mg_2CO_3、NaOH、KOH,温度)对菌株生长的影响,拮抗性、产酶活性检测及菌株LA4的分子进化鉴定等研究.结果发现,47株放线菌的15%属于诺卡氏菌属,70%属于链霉菌属,10%属于游动放线菌属,其中嗜碱链霉菌属占优势.在pH 7～11范围内,47株嗜碱放线菌均能生长.生长率为92%～95%.NaCl、KCl、MgCl,对嗜碱放线菌均具有抑制作用,NaCl、KCl的抑制作用高于MgCl_2,NaCl、KCl浓度超过10%时而MgCl_2 浓度超过15%时嗜碱放线菌完全停止生长.47株嗜碱放线菌对Na_2CO_3、K_2CO_3、MgCO_3、KOH、NaOH等碱性物质没有选择性,生长良好.47株嗜碱放线菌的最适生长温度为28～30℃.超过55℃后均不能生长.从47株嗜碱放线菌中筛选出了30株具有抗菌活性的菌株,其中对大肠杆菌有抑制作用的有11株,占36.7%,对金黄色葡萄球菌有抑制作用的有20株,占66.7%,对枯草杆菌有抑制作用的有16株,占53.3%;其中4株嗜碱放线菌LA4、LA24、LA33和LA19对3种指示菌均表现出抑制作用.在47株嗜碱放线菌中,74%具有淀粉酶活性,81%具有纤维素酶活性,43%具有蛋白酶活性,49%具有脂肪酶活性.通过分子鉴定,发现LA4为链霉菌中尚未报道的一个新亚种,其16S序列GenBank登录号为FJ182229.本研究结果表明新疆罗布泊外围地区存在大量的产纤维素酶、淀粉酶的嗜碱放线菌,并且潜藏着新的放线菌资源,为该地区嗜碱放线菌的种质资源开发和新药筛选有效菌源提供了参考.图5表4参20     

Characterization of two metal resistant Bacillus strains isolated from slag disposal site at Burnpur, India

Two strains of Bacillus sp. resistant to arsenate and lead designated as AsSP9 and PbSP6, respectively were isolated from the slag disposal site. They were identified to be related to Bacillus cereus cluster on the basis of 16S rDNA based sequence analysis and phenotypic characteristics. Both were rod-shaped (AsSP9, 2-5 microm and PbSP6, 2-4 microm), aerobic, salt tolerant (2-8% NaCI), endospore forming bacteria with minor differences like the AsSP9 showed sporangial bulging and PbSP6 had positive lipase activity. The temperature range for their growth was 20-40 degrees C and pH range 6.0-9.0 with an optimum temperature of 37 degrees C and pH of 7 for both strains. The principal nitrogen sources forAsSP9 and PbSP6 were DL-Tryptophan and L-Phenylalanine, respectively. The suitable carbon source forAsSP9 was lactose and for PbSP6 sucrose. The heavy metal accumulation efficiency was found to be 0.0047 mg g(-1) of dry mass forAsSP9 and 0.686 mg g(-1) of dry mass for PbSP6.     

Degradation of benzyldimethyl hexadecylammonium chloride by Bacillus niabensis and Thalassospira sp. isolated from marine sediments

Following enrichment in its presence, two strains of bacteria, isolated from marine sediments, were shown to degrade the quaternary ammonium surfactant benzyldimethyl hexadecylammonium chloride (BDHAC) in a minimal salts medium. The bacteria identified by 16S ribosomal deoxyribonucleic acid sequencing were shown to belong to several genera and determined to be Bacillus niabensis and Thalassospira sp. Initial investigations demonstrated that the bacteria were capable of degrading BDHAC when it was present at concentrations in the range 2–4 mg mL^?1. In media containing BDHAC, up to 90% was degraded within 7 days, but limited growth of the strain was observed at 2 and 4 mg mL^?1 BDHAC. Preliminary analysis of samples after degradation experiment by electrospray ionization mass spectrometry/mass spectrometry produced a peak with a parent–daughter ion transition of 136 → 91, corresponding to N,N-dimethylbenzylamine. The presence of this potential metabolite suggests the cleavage of the C-alkyl-N bond as a step in BDHAC catabolism.     

Plasmid mediated antibiotic resistance in marine bacteria

This research work was conducted in Uppanar estuary to ascertain the role of plasmids in the antibiotic resistance of bacteria. Water and sediment samples were collected for a period of three months. When tested against 20 antibiotics 22 MAR strains were isolated from the samples, which were found resistant to 5-13 antibiotics. They belong to 7 genera and 10 species. Gram-negative bacteria namely Neisseria mucosa, N. sicca, Branhamella catarrhalis, Klebsiella ozaenae, Citrobacterintermedius, Pseudomonas fluorescens and Enterobacter aerogenes were isolated. Gram-positive bacteria were of Bacillus subtilis, B. megaterium and Micrococcus luteus. When plasmid curing was done using acredine orange, the resistance against penicillin-G, ampicillin, tetracycline, amoxycillin, kanamycin, and chloramphenicol were totally lost in all strains, which confirmed the role of plasmid in these strains against antibiotics. Ten strains belong to different species were selected for the plasmid isolation and electrophoresis was done. Presence of plasmids in all strains was confirmed and the molecular weight was in the range of 2850 to 3170 bp. The study revealed that MAR strains are common in Uppanar estuary and they are plasmid mediated. This environment is seemed to be deteriorating at an alarming rate.