PP333在库拉索芦荟组培快繁中的应用研究

以MS 6-BA2.5mg/L NAA0．2mg/L为初代培养基，以MS 6-BA2.0mg/L NAA0．1mg/L为增殖培养基，1，3MS IBA0.5mg/L为生根培养基，添加不同浓度的PP333，其结果表明：初代培养基中添加0．5mg/LPP333有利于库拉索芦荟外植体出芽，增殖培养基中添加0．1-0．5mg/LPP333对库拉索芦荟试管苗增殖有效，而在生根培养基中添加0．5—1．0mg／LPP333有利于生根和移栽，其中以1／3MS IBA0．5mg/L PP3330．5mg/L培养基对库拉索芦荟试管苗生根和移栽有良好效应．     

麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源

建立了培养周期短、再生效率高的麻疯树叶片再生体系.6-BA是诱导麻疯树叶片产生愈伤组织的关键外源激素,添加低浓度的2,4-D能增强6-BA的诱导效果.最佳愈伤组织诱导培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L 2,4-D,瘤状愈伤组织的诱导率高达91.98%±2.1%.光培养下产生的愈伤组织质地紧密,瘤状结构丰富,再生能力强.随着继代次数的增加,愈伤组织褐化加重,逐渐失去再生能力.不定芽再生培养基中,比较了3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ对诱导愈伤组织分化不定芽的影响.6-BA诱导不定芽的能力最优,其次是TDZ,KT最差.KT与BA的组合诱导不定芽再生的能力最强,最适的不定芽再生培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L GA3,再生率mg/L)中均能产生根系,平均根系5.2个.对麻疯树叶片再生的各阶段进行了石蜡切片,揭示了不定芽的起源及发育的全过程,明确了不定芽起源于叶片的表皮细胞层.     

鞑靼荞麦离体再生体系的建立

研究了苗龄、外植体、激素配比对鞑靼荞麦(Fagopyrum tataricum Gaertn.)离体培养的影响,初步建立了鞑靼荞麦离体再生体系.结果表明,鞑靼荞麦离体再生的最佳取材时间为苗龄6～8 d;诱导愈伤组织的最适培养基为Ms+2.0 mg/L 2,4.D+1.5 mg/L 6-BA,子叶诱愈率达75%左右,下胚轴诱愈率可高达86.62%;愈伤组织分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L IAA+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L K1.+0.5 mg/L TDZ,来自下胚轴愈伤组织的分化率可达9.52%.下胚轴的诱愈率与分化率均高于子叶,更适于离体再生培养.培养基巾加入AgNO_3后,能有效降低褐化率.生根最适培养基为含有0.5 mg/L NAA的1/2MS培养基,生根率在50%左右.TDZ在诱导鞑靼荞麦的愈伤组织分化出芽的过程中起到明显的促进作用,可提高分化率约20%.表3图2参23     

黄姜组培快繁技术试验研究

分别以黄姜茎段、叶片、块根为外植体,进行无菌系建立、芽分化、生根等试验,探讨黄姜组培快繁技术.结果表明:(1)茎段在①MS BA1.0 mg.L-1 NAA0.2 mg.L-1(单位下同);③MS BA2.0 NAA0.2;⑤B5 BA1.0 NAA0.2;⑦B5 BA2.0 NAA0.2四个培养基上培养,均能诱导出愈伤组织,但尤以⑦号培养基长势最佳;而在这四个培养基上接种的叶片因为全被污染,无愈伤组织形成.(2)块根在②MS BA1.0 NAA0.5;④MS BA2.0 NAA0.5;⑥B5 BA1.0 NAA0.5;⑧B5 BA2.0 NAA0.5四个培养基上均不能诱导成愈伤组织.(3)愈伤组织在①~⑧号共八个培养基上均能分化出芽,但分化率不一,以③号最高(达100%),④号最低(25.0%).(4)当丛生芽长至高约3~4 cm时,转接到以MS或1/2MS为基本培养基、附加有不同浓度NAA和IBA的培养基中,进行生根培养.生长素NAA与IBA配合均能诱导生根,NAA的浓度增高对根的诱导有抑制作用,而且使苗的生长受阻,出现叶片卷曲现象,用1/2MS与用MS相比,用1/2MS生根更粗壮.(5)将经过炼苗的生根试管苗移栽到混有河沙和砻糠灰(体积比为1:2)的复合基质中,移栽后35 d成活率达到87%以上.     

TDZ和CPPU在虎杖组织培养中的应用

将高活性细胞分裂素类物质TDZ和CPPU应用于虎杖的组织培养研究.经实验筛选发现,虎杖茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,其诱导愈伤组织较适的培养基组成为MS 0.5mg/LCPPU 0.2mg/LNAA,适宜的愈伤组织增殖培养基为SH 0.05mg/LTDZ 1.0mg/LNAA;诱导芽分化的适宜培养基为MS 0.05mg/LTDZ 0.5mg/LNAA;促进幼苗生长的培养基为MS 0.1mg/LCPPU 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭.TDZ和CPPU在愈伤组织的诱导、不定芽的分化及组培苗的生长等方面表现出不同的效果.以此方式进行虎杖人工快速繁殖,繁殖系数可达到5～7,繁殖时间缩短为2～3wk.图4表2参12     

菊花组培快繁技术研究

以菊花嫩茎段为材料,进行无菌系建立、芽分化、生根等试验,探讨菊花组培快繁技术.结果表明:(1)以MS BA2.0 mg.L-1 NAA0.1 mg.L-1(单位下同)为培养基,分别置于普通培养室(不开灯,200~500 lux)与人工气候箱中培养,在前者条件下基本上不诱导芽的形成,25天后有部分黄白色愈伤组织形成;而在人工气候箱中培养则产生丛生芽,每茎段在30 d后可形成8~10个丛生芽.(2)分别以①MS BA1.0 NAA0.1,②MS BA2.0 NAA0.1,③MS BA3.0 NAA0.1为增殖培养基,培养25 d后芽增殖3.65~5.90倍.(3)在a.1/2MS NAA0.2;b.1/2MS IAA0.2;c.1/2MS IBA0.2共三个培养基中进行生根培养,生根率均达100%,但前两个培养基中长出的根系细长、数量少,而后一个培养基则根系粗短、数量多.     

马尾松幼胚培养愈伤组织诱导的初步研究

取优良的马尾松幼胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的1/2MS培养基上于室温25±2℃进行组织培养.研究表明,以1/2MS为基本培养基时,进行愈伤组织诱导的最佳激素配比为1/2MS BA1 NAA0.1 0.6%琼脂 30/L蔗糖.愈伤组织大多为白色或白绿色的颗粒状,质地疏松半透明而有光泽.NAA是诱导愈伤组织的必需因子,但量过多又不利于外植体不定芽的产生.图1,表2,参24.     

麻疯树成熟胚乳再生植株及其气孔分析

对麻疯树成熟胚乳进行组织培养获得胚乳再生植株,并对其气孔进行分析.麻疯树成熟胚乳在25℃、12 h光照条件下培养7 d愈伤组织诱导完成,2,4-D浓度为2.0 mg L-1的MS培养基愈伤诱导效果最好,诱导率达89.29%.愈伤组织在含BAP的改良培养基上培养至黄绿色后转入分化培养基,在含IAA 0.25 mg L-1和ZT 1.5 mg L-1的WPM培养基上不定芽分化率达32.50%.将分化的不定芽从愈伤组织上剥离后转入含IBA、BAP和GA3的培养基上进行芽伸长培养.取胚乳不定芽叶片接种在含IBA 0.1 mg L-1、BAP 0.5 mg L-1和TDZ 0.5 mg L-1的MS培养基上诱导生芽后,再转入含IAA 0.25mgL-1、KT 0.5mg L-1、BAP 1.0 mg L-1和GA3 0.25 mg L-1的培养基上进行丛生芽的诱导,成芽率为85.2%.这些芽在含0.1 mgL-1 IBA的1/2 MS培养基上生根,大约有37.5%的芽生了根,平均有5.2条根系形成.与母本植株相比,再生的胚乳植株保卫细胞更大,且气孔密度减小.图2表6参24     

芒苞草（芒苞草科）种子的无菌萌发研究

选取野外采回的芒苞草种子为材料,研究无菌水和不同状态Ms培养基以及不同激素种类和浓度对芒苞草种子萌发的影响,并初步探讨了芒苞草幼苗的生长情况.结果表明:经4℃的低温春化处理2 mo后,播种在无菌水中的芒苞草种子萌发率可达95%,比同样条件下MS液体(25.1%)和固体(10.4%)培养基中的萌发率高;在有关激素影响的实验中,无菌水中6-BA和GA,对种子萌发没有促进作用,液体MS培养基中的1.0 mg/L GA,明显促进种子萌发,而固体MS培养基中0.5 mg/L 6-BA对种子萌发的促进作用较明显,1.0 mg/L 6.BA有利于从生芽的诱导.将无菌水和液体MS培养基中已发芽的芒苞草种子转移至固体MS培养基中培养可长成小植株.     

香花槐组培苗快繁体系的建立及工厂化育苗的主要影响因素

建立了香花槐组培苗快繁无性系．在改良MS培养基中添加ρ(6-BA)／mg L^-1=0．35～0．5、ρ(NAA)／mg L^-1=0．05～0．08，ρ(GA3)／mg L^-1=0．07～0．1作为生长培养基．在丛生芽诱导培养基中，ρ(6-BA)／mg L^-1=0．8～1．4，其余成分同生长培养基．两种培养方法同时使用，保证了组培苗繁殖系数为5左右．生根培养基中大量元素为MS基本培养基的1／4，ρ(IBA)／mg L^-1=0．1～0．5、ρ(IAA)／mg L^-1=1．7～2．5，香花槐组培苗的生根率为90％．炼苗后组培苗的移栽成活率为85％，且植株表型未见变异．将MS基本培养基中硝酸钾的含量由1.9g／L提高至2．199～2．931g／L，可满足每代香花槐试管苗生长25～35d期间对钾的需求．将培养基中6-BA的含量降至0．4mg／L，并采用合适的组培容器，在连续培养2、3代后，可将超度含水态苗的发生频率控制在10％以下，在6mo内生产100万株香花槐组培移栽苗．图1表1参16     

青蒿试管苗开花及用花器官为外植体诱导丛生芽生产青蒿素

将培养于MS培养基上5wk的青蒿试管苗置于光周期13，光强6000lx，温度为26℃（昼）和22℃（夜）的条件下，成功地诱导其开花，利用不同发育阶段的花蕾和花器官为外植体诱导丛生芽，发现不同浓度（ρ）的6－BA对丛生芽的诱导率和青蒿素的生物合成有重要影响。结果表明：以花蕾为外植体诱导丛生芽的最佳培养基是：MS附加4.0mg L^-1的6－BA和0.05mg L^-1的NAA；但当ρ（6－BA）在0－0.5mg L^-1之间时，有利于青蒿素的合成ρ（6－BA）=0.5-4mg L^-1时抑制青蒿素的生命合成，丛生芽中促进青蒿素合成的最佳ρ（6－BA）为0.5mg L^-1，用HPLC法测定发现用此法得到的丛生芽青蒿素的含量比直接利用叶片诱导的丛生芽青蒿素含量高1倍。     

水浮莲(Pisia stratiotes Linn.)的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮连(Pistia stratiotes Linn.)通过器官发生途径的体久高效再生与繁殖方法.采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成合愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生.将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株.将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可由1个小苗每秒殖出10个新的植株.本研究是关于该植物体外再生的首次报道.水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不公可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传达室转化系统的建立.由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复.     

麻疯树愈伤组织的诱导及快速繁殖

以麻疯树(Jatropha curcas)的种子、叶柄、叶片为实验材料进行愈伤组织的诱导及快速繁殖的实验．用不同浓度的BA和IBA对其不同外植体进行试验，发现用MS培养基加0．5mg／LBA和1mg／L IBA对叶片的效果最佳．在相同BA浓度处理条件下，减小IBA浓度会对下胚轴愈伤组织的出芽产生明显的效果．叶柄要求的浓度更低，0．1mg／L BA和0．1mg／L IBA为最佳．不定芽在无激素的MS培养基中进行生根培养，通过几天的练苗过程，就能转到土壤中生长．图1表2参13     

水浮莲（Pistia stratiotes Linn．）的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮莲（Pistia stratiotes Linn．）通过器官发生途径的体外高效再生与繁殖方法．采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生．将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株．将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可以由1个小苗繁殖出10个新的植株．本研究是关于该植物体外再生的首次报道．水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不仅可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传转化系统的建立．由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复．图3表1参24     

‘香玲’核桃试管苗生长条件的优化

为优化核桃试管苗生长条件,向核桃优良品种规模化栽培提供大量优良的种植材料,以‘香玲’核桃实生苗为材料,对基本培养基的类型(MS,DKW,WPM)和凝固剂种类(琼脂,Phytagel,二者结合)进行了筛选,并采用完全随机试验设计研究了细胞分裂素种类和浓度对其试管苗生长的影响.试验结果表明:基本培养基与凝固剂的种类,以及细胞分裂素的种类与浓度对芽苗生长的影响很大.以DKW为基本培养基,2.2 g/L Phytagel为凝固剂,激素配比为0.8 mg/L BA+0.01 mg/L IBA,有利于芽苗增殖,增殖可达4.70;后在0.8 mg/L KT+0.01 mg/L IBA进行壮苗,即可进行生根培养.不同基因型对基本培养基中无机盐成分的需求不同,含有较丰富矿物质的Phytagel有利于芽苗生长.BA促进腋芽的萌动和增殖,而KT则有利于壮苗.图4表3参22     

湖南耐寒桉树优良单株组培研究

本研究以湖南省林业技术推广总站在湖南选育的17个耐寒桉树优良单株为试验材料,进行组培繁殖,有14个优良单株成功地诱导出了愈伤组织或芽。结果表明,以一年生扦插苗的当年生嫩枝作为外植体来源,污染率低且愈伤组织和芽的诱导率高;0.25％氯化汞消毒15—20分钟,可将污染率控制在70％以下,且对外植体的损害最小;按树最佳的诱导培养基为:1/2MS+BA_(1.0)+IBA_(0.25),最佳的继代培基为:MS+BA_(1.0)+KT_(1.0)+VB2_(10)。     

三叶青水培扦插快速生根研究

以三叶青枝条为试验材料开展三叶青水溶液扦插快速生根试验.设置冷开水、纯净水、1/8 MS无机营养液三种溶液开展最佳溶液种类筛选,添加不同浓度植物生长素IAA、NAA、IBA筛选最佳生长素及其浓度,并设置4 d、6 d、10 d三个不同处理时间进行最佳时间筛选.试验结果表明,冷开水在所选3种溶液中效果最佳,在IBA 8 mg/L浓度下处理6 d,15 d后有生根,30 d后生根率94.59%.     

铁观音茶树体胚发生及其内源激素变化

以乌龙茶品种铁观音茶树的未成熟胚为供试材料,建立高效的茶树体胚发生再生体系,同时采用高效液相色谱法(HPLC)分析茶树体胚发生过程中各个不同发育阶段的内源激素含量变化趋势.结果显示,诱导茶树体胚发生的培养基为改良MS培养基+2 mg/L苄基腺嘌呤(BA)+0.2 mg/L吲哚丁酸(IBA)+800 mg/L甜菜碱,体胚增殖系统维持途径的培养基为改良MS培养基+3 mg/L肉桂酸+20 g/L蔗糖+10 g/L山梨醇.当3%蔗糖与2%山梨醇组合使用时,子叶形胚的诱导率明显提高.将诱导产生的子叶形胚转接至添加5%蔗糖与5%聚二乙醇(PEG)的无激素MS培养基中,经过40 d左右培养,体胚能正常成熟.成熟体胚接种在附加2 mg/L BA与0.1 mg/L IBA的MS培养基上可以萌发成苗.在体胚发生早期,玉米素(ZT)和赤霉酸(GA3)含量均是先下降,在子叶形胚时期降至最低值,到体胎发育后期的成熟胚与萌发阶段呈明显上升趋势;脱落酸(ABA)含量由球形胚到子叶形胚阶段一直呈现下降趋势,到成熟胚阶段时,出现一个明显的峰值;球形胚中的吲哚乙酸(IAA)含量显著高于其他阶段,之后迅速降低,波动变化.ABA/IAA的比值先增大,然后减小;ABA/GA3的比值体胚发育前期维持在较高水平,到成熟萌发阶段下降;球形胚阶段IAA/ZT的比值高于其他各个阶段.本研究表明茶树不同发育阶段胚胎的体胚诱导率不同,与生理状态及其内源激素动态变化有关;同时茶树中内源激素含量和比例在体细胞胚胎发育过程中有显著的变化,这种变化在不同胚胎发育阶段起着特定的调节作用.     

根癌农杆菌介导的高赖氨酸蛋白基因转化叶用莴苣的研究

构建了植物表达载体pLBI，该载体携带35S启动子、高赖氨酸蛋白基因(LRP)、NPTⅡ基因和NOS终止子，对影响根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens L.)转化的多种因素进行探索后，建立了一种农杆菌介导的稳定的叶用莴苣遗传转化系统．选择目前生产上大量推广应用的叶用莴苣品种，以其无菌苗子叶为外植体，经农杆菌LBA4404(含质粒pLBI)感染，在含ρ(Kan)／mgL^-1=100的芽分化培养基上筛选转化芽，转入含相同浓度抗生素的生根培养基上进行生根筛选，直至得到完整的再生植株．PCR扩增及Southern blot的检测结果均表明，高赖氨酸蛋白基因已整合到叶用莴苣基因组中．图4表4参6     

唐菖蒲原球茎培养的研究

以唐菖蒲球茎芽切段为外植体在含有2，4-D的脱分化培养基上诱导的愈伤组织，可分化出具有双极性的原球茎．通过继代培养，选择了合适的培养条件：激素配比ρ（2，4-D）＋ρ（NAA）＝1mm／L＋0．5mg／L，ρ（Sugar）＝30g／L．pH5．8，θ＝21～26℃．光照液体浅层培养．在优化的条件下，利用双层板径向流生物反应器进行唐菖蒲原球茎培养，28d生物量增殖8倍，原球茎数增殖9倍．