红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycorisradiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L. radiataagglutinin, LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,SephacrylS-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0. 95μg/mL和1. 9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低II型人类单纯疱疹病毒(HSV-II)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50 ) =5~10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性. 图1表6参15     

脆江蓠凝集素的部分性质及细胞凝集作用

脆江蓠藻体的磷酸盐缓冲液浸提液 ,经硫酸铵分级沉淀 ,再经DEAE -Sepharose和SephadexG 10 0层析纯化 ,得到脆江蓠凝集素 (GBL) .经测定该凝集素是一种分子量为 33.1× 10 3 ～ 33.8× 10 3 的糖蛋白 ,分子中含有 11%的中性糖 ,具有很高的耐热性 .GBL的凝血活性可被某些单糖或双糖及卵粘蛋白抑制 ,当浓度为 2 .34 μg/mL时引起兔红细胞凝集 ,浓度为 18.75 μg/mL时凝集绵羊红细胞 ,但对鸡、鸭、鸽子红细胞及人A、O、或B型血细胞没有凝集作用 .GBL能够凝集两种单细胞藻类 ,当浓度为 18.75 μg/mL时能凝集盐生杜氏藻 ,但藻细胞密度减少到 18.3× 10 4 /mL时不能发生凝集作用 ;GBL浓度为 9.37μg/mL时引起蛋白核小球藻凝集 ,但当藻细胞密度减少到 2 8.9× 10 4 /mL也不产生凝集反应 .GBL还能够凝集正常的枯草芽孢杆菌和经过热处理的酿酒酵母细胞 .图 3表 6参 14     

齐墩果酸对卵巢癌细胞IGROV1和乳腺癌细胞MDA-MB-231生长的抑制作用

通过细胞增殖抑制实验、MTT法检测肿瘤细胞的活性,研究了齐墩果酸(OA)对卵巢癌细胞株IGROV1和人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用.结果显示,齐墩果酸可降低IGROV1和MDA-MB-231的细胞增殖能力并呈剂量依赖性,半数有效抑制浓度IC50分别为36.58μg/mL和38.8μg/mL(P0.01).表明齐墩果酸对这两株恶性肿瘤细胞具有抑制活性,且对IGROV1的抑制活性高于对MDA-MB-231的抑制活性.图2表4参15     

氨基酸侧链基团的特异性化学修饰对玉帘凝集素凝血活性和促淋巴细胞有丝分裂活性的影响

石蒜科植物玉帘 (ZephyranthescandidaHerb)的球茎 ,经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE -Sepharose和SephacrylS - 10 0分子筛层析 ,分离纯化出玉帘凝集素 (Z .candidaaggulutination ,ZCA) ,在SDS -PAGE显示单一蛋白带 ,经分子筛层析测得相对分子量 (Mr)约为 4 8× 10 3 .采用不同的化学修饰试剂对玉帘凝集素中的不同氨基酸侧链基团进行修饰 .结果表明 :Arg残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 73% ,Trp残基的修饰引起兔红细胞凝集活性下降 36 % ;Ser/Thr残基的修饰导致促淋巴细胞有丝分裂活性下降 2 9.3% ,细胞分裂比率下降 7.2 % .图 3表 2参 12     

金针菇菌柄特异性蛋白质Flammutoxin的表达

通过地高辛标记的Flammutoxin基因特异性探针与金针菇(Flammulina velutipes)菌丝体、菌柄和菌盖中的mRNA进行杂交,结果表明在金针菇的菌柄中有该蛋白质的表达,而在菌丝体和菌盖中均无该蛋白质的表达.此外在检测的平菇(Pleurotus ostreatus)、香菇(Lentinus edodes)、杏鲍菇(P.eryngii)和双孢蘑菇(Agaricus bisporus)中也无该蛋白质基因的表达.     

播娘蒿DsCOR蛋白纯化、抗体制备及对冷诱导的响应

为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)极强的抗寒特性,在大肠杆菌中重组表达已克隆的播娘蒿抗寒基因DsCOR,比较Ni亲合层析和煮沸-透析袋电洗脱蛋白纯化方法,制备纯化的DsCOR重组蛋白多克隆抗体,Western Blotting检测播娘蒿在寒冷胁迫下DsCOR的表达特性.结果表明,两种纯化技术均能纯化DsCOR蛋白,透析袋电洗脱法纯化蛋白浓度为1.21mg/mL,是Ni亲和层析法纯化蛋白浓度的2倍,且经PEG8000浓缩后的蛋白总量分别为9.075mg和4.256mg;制备的DsCOR抗体效价达1:12800,Western Blotting检测显示只有经过低温冷诱导的播娘蒿DsCOR蛋白才表达,证明了DsCOR基因受低温诱导的规律.     

白眉蝮蛇毒精氨酸酯酶对CHL细胞增殖抑制和染色体畸变的影响

研究了蝮蛇清栓酶的有效成分精氨酸酯酶体外对中国仓鼠肺成纤维细胞 (CHL)增殖和染色体畸变的影响 .精氨酸酯酶的浓度以酶活单位U表示 .细胞增殖抑制试验和染色体畸变试验都用两种方法 :直接法和代谢活性法 .精氨酸酯酶设 3个浓度 :1.0× 10 -3 U /mL ,0 .5× 10 -3 U /mL和 0 .2 5× 10 -3U/mL .其中最高浓度比临床治疗浓度高约10 0倍 .细胞增殖抑制试验采用细胞贴壁培养 ,乙醇固定 ,结晶紫染色 ,单层细胞密度计测定细胞密度 .染色体畸变试验采用给药后 2 4h和 48h收集中期分裂细胞 ,低渗固定 ,制片 ,Giemsa染色 ,观察 10 0个中期分裂细胞的染色体结构异常及多倍体的出现率 .试验结果表明 ,精氨酸酯酶在上述浓度对CHL细胞的增殖没有抑制作用 ,对CHL细胞的染色体结构也没有影响 .表 2参 10     

黄精多糖的抗单纯疱疹病毒作用

体外抗单纯疱疹病毒试验表明：黄精多糖对非洲绿猴肾细胞（Vero cell）的最大4无毒浓度为16mg/mL。在对Vero细胞无毒性的浓度下对单纯疱疹病毒1型（Stoker株）和2型（333株和Sav株）均有显著的抑制作用，对Stoker株的半抑制浓度（IC50）为3.95mg/mL，最小有效浓度（MIC）为1.0mg/mL；对333株的IC50为8.0mg/mL，MIC为8.0mg/mL；对Sav株的IC50为7.72mg/mL，MIC为4mg/mL。MTT染色的结果表明，黄精多糖能显著提高病毒感染的Vero细胞的活力，对细胞有保护作用。图1表4参11。     

经DNA改组的植酸酶纯化和酶学性质

经DNA改组的重组植酸酶通过有机膜超滤、DEAE -SepharoseF .F离子交换层析两步纯化 ,其纯度可达90 %左右 .SDS -PAGE分析表明 ,重组植酸酶的分子量Mr 约为 85 0 0 0 .酶学实验结果表明 :该酶反应最适pH为 4 .5 ,最适温度为 4 0℃ ,Km为 0 .11mmolL-1,Vmax为 96 4mmolL-1min-1,植酸酶活性不依赖任何金属离子的存在 .向酶液中分别添加MgSO4、阿拉伯糖、果糖、半乳糖、乳糖、海藻糖、蔗糖及葡萄糖 (10 0 g/L)后 ,植酸酶在 90℃处理 10min的活性比对照增加了 1～ 3倍 ,说明这些物质为酶保护剂 ;在 37℃下以植酸钠为底物的SDS对酶活性具有强烈的抑制作用 ;金属离子如Cu2 ,Zn2 ,K 以及EDTA对酶活性具有较弱抑制作用 ;金属离子如Mn2 ,Mg2 、Fe2 、Ba2 、Ca2 、Co2 低浓度时对酶活性有促进作用 ,当Mg2 浓度增加到 10mmolL-1时 ,则对酶活性起抑制效应 .图 4表 4参 19     

流式细胞术在铜对藻类生态毒理研究中的应用

用流式细胞术研究了铜对铜绿微囊藻的毒性作用 ,结果表明 ,一定浓度的铜对藻类的生长具有抑制作用 ,而且这种抑制作用随着铜浓度的增加而增加 ,96h的EC50 为 82 86μg·l- 1 ,当铜浓度为 1 0 1 2 5 μg·l- 1 时 ,藻细胞的生长几乎完全受到抑制 .流式细胞仪检测结果可以说明铜对藻类群体作用的过程 ,即铜并不是同时对所有的藻细胞产生抑制作用 .低浓度时只是对部分细胞产生抑制 ,随着铜浓度的升高 ,受到抑制的细胞也越多 ,当达到最高浓度时 ,几乎所有细胞的生长都受到抑制 .     

金黄色葡萄球菌的演相培养及A蛋白的提取

对金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）ＣｏｗａｎⅠ的培养及Ａ蛋白提取工艺进行了优化研究．结果表明：在培养基中分别增加牛肉膏和蛋白陈的含量，有利于提高菌体生物量及Ａ蛋白的得率；少量酵母浸膏及葡萄糖对生物量及Ａ蛋白得率有促进作用，但当达到一定浓度时则会产生基质抑制作用；恒定培养过程的ｐＨ值有利于Ａ蛋白得率的增加，０．０３（）／ｍｉｎ通气量、搅拌速度２００ｒ／ｍｉｎ是能满足菌体生长的条件．根据Ａ蛋白耐热性强这一特性，采用加热法除去大部分杂质，然后用ＩｇＧ－琼脂糖凝胶亲和层析实现了Ａ蛋白的提纯．     

农杆菌介导将高赖氨酸蛋白基因导入谷秆两用水稻

采用农杆菌介导法将高赖氨酸蛋白基因导入到谷秆两用水稻中，GUS组织化学染色、PCR扩增、Southem blot分析表明，该基因已经整合到水稻基因组中，测定9株转基因水稻叶片赖氨酸含量，大部分植株有明显的提高，最高幅度达到了22．71％，图6参15     

小麦waxy蛋白亚基1D-SDS-PAGE分离方法改良

对小麦ｗａｘｙ蛋白的提取技术和电泳后胶片的银染方法进行了改良：将无胚的半粒种子研磨成粉，用洗液浸泡２ｈ代替蒸馏水浸泡过夜，并且去掉了用洗液反复洗涤和离心的程序；电泳后胶后的染色采用快速银染法代替常用的银染法，改良后的单向十二烷基酸钠聚丙烯酰胺胶电泳方法（１Ｄ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）具有省时、方便、经济和有效的特点，可适用于大批小麦材料的ｗａｘｙ蛋白亚基的分析，图１参５。     

家蝇抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

通过体壁损伤诱导家蝇（Musca domestica)幼虫产生免疫血淋巴，经沸水浴热变性、减压蒸馏浓缩、Sephadex G-15柱脱盐、CM-Sepharose离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤等步骤，分离得到一种具抗菌活性的蛋白质，并达电泳纯，结果表明，分离物不具血细胞凝集活性，也不是溶菌酶，而是一种未见报道的抗菌蛋白，经SDS-PAGE测得，该抗菌蛋白Mr=12600,等电点为9.8。     

根瘤菌新类群的全细胞蛋白电泳及16S rDNA全序列分析

应用ＳＤＳ全细胞蛋白电泳技术对根瘤菌３个新类群进行聚类分析,并对３个新类群中心菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ全序列（Ｍｒ≈１．５ｋｂ）进行了测定。将所测序列与ＥＭＢＬ／ＢａｎｋＩＴ／ＤＤＢＪ资料库中根瘤菌及相关菌已知种的１６Ｓ ｒＤＮＡ全序列进行聚类比较,得到系统发育树状图,树状图中,菌株ＳＨ２２６２３和ＳＨ１９３１２与山羊豆根瘤菌、葡萄土壤杆菌、根癌土壤杆菌和悬钩子土壤杆菌在同一个分支上,彼此亲缘关系较     

大鸨生长期能量代谢和蛋白质沉积量的初步研究

对不同日龄笼养大鸨 (Otistarda)的能量代谢和蛋白质沉积量进行研究 .结果表明 ,5 0日龄、70日龄、30 0日龄和 4 0 0日龄雄性大鸨的能量日摄入量分别为 14 98.9kJ、2 376 .2kJ、2 397.4kJ和 2 4 6 5 .9kJ;能量代谢率分别为 82 .3%、81.8%、81.8%和 83.1% ;蛋白质的日沉积量分别为 5 .8g、13.4g、15 .8g和 13.5g .表 3参 9     

TMV或宁南霉素处理对烟草叶片及类囊体膜蛋白组成的影响

对烟草花叶病毒(TMV)侵染、宁南霉素钝化处理的烟草叶片进行了叶片全蛋白多肽组分、类囊体膜蛋白组成的分析.结果表明,TMV侵染或钝化实验的烟草叶片中均出现TMV衣壳蛋白;但是与对照相比,TMV侵染叶片中Rubisco大亚基减少、小亚基增加,类囊体膜蛋白中PsaA、PsaB和Mr=33×103蛋白含量减少.表明TMV侵染要同时影响叶片细胞核基因组和叶绿体基因组的基因表达,从而影响光合作用碳代谢和类囊体膜光系统Ⅰ和Ⅱ.宁南霉素对TMV病毒短时间内具有钝化作用,而较长时间的作用效果不同,10 min钝化样品的蛋白组分保持较为完整,而30 min钝化样品的多肽缺失较为严重.图5表1参11     

干旱地区几种豆科植物根瘤菌的数值分类和SDS-PAGE全细胞蛋白电泳分析

从新疆、内蒙干旱地区苜蓿属、草木樨属、锦鸡儿属植物的根瘤中分离出５４株根瘤菌,对其中４８株根瘤菌和２２株参比菌一起进行了数值分类研究,在８５％的相似性水平上,未知菌分为３个不同于已知种的新群．另加入６株分离自锦鸡儿属植物的根瘤菌,共７６株菌进行了全细胞蛋白ＳＤＳＰＡＧＥ分析,在８０％的相似性水平上,已知菌相应成群,未知菌除ＸＪ９６３４２在６８％的相似性水平上和群５、６、７、８、Ｒ．ｇａｌｅｇａ聚群外,其余未知菌则分布在４、５、６、７、８、９、１０七个群中．群４中所有菌株属于数值分类的群１;群６中有３株菌属于数值分类的群３;群９中有８株菌为数值分类群２的菌株．反映了两种方法在分类上得到的结果比较近似．     

豆腐柴叶蛋白营养及安全性研究

对以豆腐柴（Ｐｒｅｍｎａｍｉｃｒｏｐｈｅｌａ）叶为原料制作的叶“豆腐”的营养价值及安全性进行综合评价，为我国资源植物豆腐柴叶的开发提供可行性参考．     

圈养亚成体大熊猫日粮粗蛋白表观消化率的初步研究

研究了7只1.5-4.7岁的亚成体大熊猫对23种日粮粗蛋白的表观消化率（ADCP），结果为37．86％－83．70％。分析表明，对1．5－2．5岁的大熊猫，粗纤维采食量与ADCP有极显著的负相关关系（图1）；对2．5－4．7岁的大熊猫。粗纤维采食量与ADCP没有明显相关关系（表3）。对1．5－2．5岁大熊猫，随竹粗蛋白占总粗蛋白比值升高，ADCP呈下降趋势（图2）；2．5－4．7岁的大熊猫，ADCP随竹粗蛋白比例升高而呈上升趋势（图3）；不同大熊猫ADCP还有个体差异。图3表3参10