盐藻LHCB3蛋白的表达纯化及抗体制备

为了解盐生杜氏藻(Dunaliella salina)主要光捕获蛋白LHCB蛋白的功能,将已获得的盐藻Lhcb3基因构建到原核表达载体pET32a-DsLhcb3,通过优化表达条件,建立了高效的重组系统.pET32a-DsLhcb3在大肠杆菌中的优化表达条件为1 mmol/L IPTG在37℃下诱导4 h.采用镍离子亲合层析纯化获得LHCB3蛋白,并以此为抗原制备了多克隆抗体,经琼脂糖扩散检测效价,在1:16处有明显沉淀.提取盐藻总蛋白,经过制备的LHCB3抗体杂交,在29 000处获得两条明显的杂交条带,为进一步研究盐藻LHCⅡ蛋白表达机理奠定了基础.     

鲫鱼脑AChE制备及对几种有机磷农药敏感性研究

乙酰胆碱酯酶(AChE)是生物神经兴奋传导中的一种关键性酶。有机磷农药能够磷酰化AChE活性中心的丝氨酸羟基,导致神经传导阻断,因此AChE是有机磷农药残留检测的靶酶。文章选择鲫鱼脑作为酶源,对AChE提取方法进行了研究,并探讨了其对有机磷农药的敏感性。首先粗提AChE,通过正交试验确定了AChE酶活测定的最佳条件,研究了粗酶对几种有机磷农药的敏感性及检测限,之后通过层析方法纯化AChE,得到高活性的目标酶。研究表明AChE活性测定最佳条件为:200mmol/L底物、pH8.0、30℃水浴30min,这些因素对酶得活性影响顺序为:底物浓度pH温度时间,酶剂量对其影响最小;由鲫鱼脑粗提得到的AChE对4种有机磷农药的敏感性为:敌敌畏敌百虫氧乐果三唑磷辛硫磷乙酰甲胺磷;纯化后酶活达到了458.43μmo(lmin·mg),适合用于有机磷农药检测。     

麻疯树小热激蛋白基因JcHSP15.9的原核表达及耐热胁迫

小热激蛋白(sHSPs)是植物在逆境条件下产生的一类具有分子伴侣活性的应激蛋白,本研究拟构建原核表达载体并表达具生物学活性的麻疯树小热激蛋白以进一步研究其功能及应用.从麻疯树胚乳cDNA文库中获得全长为652 bp的cDNA序列,包含一个426 bp的开放阅读框,编码分子量大小约为15 926.13的胞质Ⅰ型小热激蛋白,命名为JcHSP15.9.通过构建原核表达载体,得到BL21(DE3)plysS/pET32a-HSP重组菌株.用JcHSP15.9在大肠杆菌中的过量表达来研究它的耐热胁迫能力,发现在常温(37℃)下重组菌株与野生型菌株生长曲线基本相似,但在高温(50℃)下重组菌较对照组菌株存活率有了显著的提高,推测JcHSP15.9可能与麻疯树的耐热胁迫有关.通过镍亲和层析柱纯化得到纯度较高的JcHSP15.9蛋白,分子量大小与预期一致,蛋白条带单一清晰.     

半挥发性有机污染物的气相色谱纯化方法

以六氯苯作为模型化合物,建立了半挥发性有机污染物样品净化的气相色谱方法.采用进样阀切换载气吹扫的进样方式,通过保留间隙柱和溶剂放空装置实现大体积进样,经过气相色谱分离后将分析物所在的半挥发性组分选择性冷凝在收集管中.本方法对模型化合物六氯苯的制备回收率为90%,对半挥发性有机污染物样品净化方法的发展具有重要意义.     

仙人掌多糖的提取分离与性质测定

仙人掌多糖具有降血糖、抗炎、免疫、抗溃疡等作用．经热水提取、乙醇沉淀、DEAE Sepharose fastflow离子交换色谱和SephadexG系列凝胶滤过色谱纯化得到5种仙人掌多糖纽分．采用醋酸纤维薄膜电泳检测多糖纯度,凝胶色谱测定相对分子质量,高效液相色谱测定糖的组成．经测定,它们的相对分子质量依次为2．0×10^3、1．0×10^6、4．0×10^3、9．2×10^5、5．0×10^3．ODP1由鼠李糖组成,ODP2可能由鼠李缚和葡萄糖组成,ODP4可能由鼠李糖和D-半乳糖组成．ODP3和ODP5分别由鼠李糖和一未知糖组分组成．表3,参12．     

芽孢杆菌植酸酶phy(ycD)基因在大肠杆菌中的异源表达与纯化

为研究中性植酸酶的性质,将芽孢杆菌来源植酸酶基因phy(ycD)构建到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,进行诱导表达,利用Ni-NAT和Superdex-75纯化后,对重组植酸酶r-phy(ycD)的性质进行分析.结果显示,该酶是Ca2+依赖性酶,Ca2+最适浓度为1 mmol/L,酶比活为4.7 U/mg,酶促反应的最适pH为6.5,在中性条件下稳定,最适反应温度为45℃,K m值和V max值分别为0.213 mmol/L和5.55 U/mg.Zn2+、Ni2+、Ba2+和Ag2+对酶促反应均有显著抑制作用.本研究表明,Ca2+对该类酶的活性和热稳定性起着关键性作用,因此在表达和纯化过程中需要在培养基和纯化所需的各类缓冲液中添加Ca2+.     

4－氨基安替比林分光光度法测定水中挥发酚的影响因素

本文介绍了测定挥发酚过程中加蒸馏水顺序、预蒸馏时的pH值、预蒸馏前试剂加入顺序、显色时试剂加入顺序、显色剂纯度、显色时间等因素对挥发酚测定的影响。实验结果表明预蒸馏时的pH值、试剂加入顺序、显色剂纯度、显色时间对测定结果都有一定影响。控制好上述条件才能获得较准确的结果。     

沉积物中多氯联苯分析的纯化条件优化研究

比较了各种填料层析柱和洗脱液的差别,并根据有机溶剂使用量较少的样品纯化方案,建立了适用低有机质含量水体表层沉积物中不同极性多氯联苯(PCBs)的分析方法.结果表明,该方法检测限在0.11 ng/g～0.35 ng/g(干重)之间,对主要多氯联苯同族体的回收率是77.9%～112.1%.用该法分析了长江中下游水体表层沉积物中的PCBs,质控结果表明,该纯化方法的效果理想.     

家蝇抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

通过体壁损伤诱导家蝇（Musca domestica)幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性、减压蒸馏浓缩、Sephadex G-15柱脱盐、CM-Sepharose离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质,并达电泳纯,结果表明,分离物不具血细胞凝集活性,也不是溶菌酶,而是一种未见报道的抗菌蛋白,经SDS-PAGE测得,该抗菌蛋白Mr=12600,等电点为9.8。     

褐菖鮋（Sebastiscusmarmoratus）金属硫蛋白的分离提纯及免疫测定

通过ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换柱层析，从褐菖的肝脏分离金属硫蛋白，经氨基区组成分析表明：褐菖的金属硫蛋白不含环状氨基酸，半胱氨酸含量达３５％，估算分子量为６７００道尔顿。等电聚焦显示两条区带，ＰＩ分别为４．０和４．２。金属硫蛋白经与牛血清蛋白交联对兔进行免疫，兔抗血清用ＰｒｏｔｅｉｎＡ亲和纯化并标记上辣根过氧化物酶，利用酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）对褐菖金属硫蛋白进行分析，测定范围为５—１００ｎｇ／ｍＬ，经诱导和没诱导的肝提取液金属硫蛋白含量分别为４５０μｇ／ｍＬ和２０μｇ／ｍＬ，两者之间差别为２０多倍。