三种海藻凝集素细胞凝集活性的比较

比较了3种经纯化的海藻凝集素即铁钉菜凝集素（IOL），鹿角沙菜凝集素（HCL0和脆江蓠凝集素（GBL）对红细胞，微藻，细菌，酵母及肿瘤细胞的凝集活性，IOL对供试的动物红细胞均有凝集作用，而HCL和GBL只对部分红细胞产生凝集作用，3种凝集素都不能凝集人的A，O，B型血红细胞。在12种供试的微藻中，有6种单细胞藻类分别被海藻凝集素所凝集，海洋微藻比淡水微藻敏感，盐生杜氏藻均可被3种海藻凝集素所凝集，3种海藻凝集素都能凝集枯草杆菌，但不能凝集胃癌细胞，3种凝集素中，IOL对细胞的凝集作用最好，表3参13     

海洋破囊壶菌△~5-延长酶和△~4-脱饱和酶在酿酒酵母中的共表达

二十二碳六烯酸(Docosahexaenoic acid,DHA C22:6n-3)是具有各种重要生理功能的高度不饱和脂肪酸.分别以质粒pYTFD5和pYFAD4为模板,扩增获得860 bp的△5-延长酶基因(elo5)和1 600 bp的△4-脱饱和酶基因(fad4).利用重叠延伸PCR构建elo5-fad4融合基因,Hind Ⅲ/Sph Ⅰ双酶切后连接到经同样处理过的pYES2.0载体,构建重组表达质粒pYEL05-FAD4.转化酿酒酵母尿嘧啶缺陷型菌株INVScl,通过缺少尿嘧啶的选择性培养基筛选阳性克隆子.添加外源脂肪酸C20:5底物.半乳糖诱导表达.气相色谱-质谱分析表明,重组酵母总脂肪酸中出现了DHA(二十二碳六烯酸,C22:6n-63)新产物,融合基因elo5-fad4在酿酒酵母中得到了表达.图7表1参18     

酶法原位制备过氧乙酸对活性艳蓝KN-R氧化脱色的工艺

利用过水解酶催化合成过氧乙酸,过氧乙酸原位氧化活性艳蓝KN-R脱色.在单因子试验的基础上,通过正交优化试验确定活性艳蓝KN-R的最佳脱色条件为:在5 m L反应体系中,最适p H 5.0,加酶量为20 U·反应-1,乙酸乙酯对过氧化氢的摩尔比率为40∶1和活性艳蓝KNR的浓度为80 mg·L-1.在此条件下反应6 h后,活性艳蓝KN-R的脱色率为81.11%,24 h后的脱色率为91.96%.在50倍放大试验中,该工艺24小时的脱色率为84.55%.     

脆江蓠凝集素的部分性质及细胞凝集作用

脆江蓠藻体的磷酸盐缓冲液浸提液 ,经硫酸铵分级沉淀 ,再经DEAE -Sepharose和SephadexG 10 0层析纯化 ,得到脆江蓠凝集素 (GBL) .经测定该凝集素是一种分子量为 33.1× 10 3 ～ 33.8× 10 3 的糖蛋白 ,分子中含有 11%的中性糖 ,具有很高的耐热性 .GBL的凝血活性可被某些单糖或双糖及卵粘蛋白抑制 ,当浓度为 2 .34 μg/mL时引起兔红细胞凝集 ,浓度为 18.75 μg/mL时凝集绵羊红细胞 ,但对鸡、鸭、鸽子红细胞及人A、O、或B型血细胞没有凝集作用 .GBL能够凝集两种单细胞藻类 ,当浓度为 18.75 μg/mL时能凝集盐生杜氏藻 ,但藻细胞密度减少到 18.3× 10 4 /mL时不能发生凝集作用 ;GBL浓度为 9.37μg/mL时引起蛋白核小球藻凝集 ,但当藻细胞密度减少到 2 8.9× 10 4 /mL也不产生凝集反应 .GBL还能够凝集正常的枯草芽孢杆菌和经过热处理的酿酒酵母细胞 .图 3表 6参 14     

乌毛蕨凝集素的部分性质

乌毛蕨的叶片经PBS抽提和硫酸铵沉淀，得到的粗蛋白经活性碳柱处理后，在分子筛层析柱Sephadex G-100上纯化得到一种凝集素(Blechnum Orientale Lectin，简称BOL)，BOL的比活性比粗提液提高了32倍，活力回收率达75％，在PAGE上显示一条蛋白染色带，而在SDS-PAGE上显示BOL由两个不同的亚基组成，亚基分子量分别为16600和22910．BOL是一种糖蛋白，其中性糖含量为20．06％．其分子中含有Mg和Ca两种金属元素，含量分别为0．08％和0．70％．BOL对温度变化敏感，其凝血活性能被N-乙酰葡萄糖胺所抑制，用滤纸圆片法检测，BOL在测试的8种菌中对大肠杆菌和玉米大斑病菌的生长有抑制作用，图4表5参13