基于有机物指纹图谱技术的长江南京段水中有机磷溯源研究

长江水环境污染物识别和溯源分析是保护长江水生态环境的前提。于2021年11月26—27日对长江南京段有机磷进行溯源调查,采用有机物指纹图谱识别技术对9个干流监测点位和7个临近入河排口监测点位之间以有机磷为代表的有机污染物的耦合关联性进行研究,筛查重点潜在污染水域及可能来源。研究结果表明,应用指纹图谱技术共识别出25类有机污染物,其中干流XC-02点位有机磷等有机污染物输入明显,主要受临近陆域污水处理厂、制药企业、石化企业及表面加工企业等的工业废水排放影响;干流XC-07点位有机磷离子峰强度升高,受上游传输与陆域入河排口XA-07点位共同影响。研究为河流有机污染物溯源提出了指纹图谱解析方法思路并得以应用,为水环境有机污染物管控提供技术支撑和决策依据。     

海水中邻苯二甲酸二乙酯的快速检测方法建立

为构建海水中邻苯二甲酸二乙酯(DEP)快速检测方法,采用胶体金酶联免疫层析技术,利用抗DEP单克隆抗体杂交瘤细胞株进行腹水制备。以邻苯二甲酸单乙酯(MEP)-OVA为包被抗原,羊抗鼠IgG为二抗,优化抗原抗体配对组合和胶体金-抗体标记条件,最后组装获得快速检测DEP胶体金免疫层析试纸条。利用包括DEP在内的12种邻苯二甲酸酯类化合物标准溶液检测试纸条的灵敏度和特异性,并利用人造海水作为稀释溶剂检测试纸条的海水环境适应性。结果显示:纯化后抗体效价最高可以达到1∶30 000以上,胶体金溶液与抗体最佳标记条件为pH=7.2,抗体最佳标记量为6μL·mL~(-1);所制备胶体金酶联免疫层析(GICA)试纸条对DEP的检测特异性较高,在人造海水条件下试纸条对DEP的检测限可达20μg·L~(-1),适用于海水中DEP的快速检测。     

抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株的构建

为了构建针对石油运输泄露导致的海洋环境中萘等多环芳烃污染的免疫学快速检测方法,需获得高效稳定的分泌抗萘单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本文以2-萘丁酸-KLH为免疫抗原免疫BALb/c小鼠,间接竞争ELISA测定小鼠血清效价,用细胞融合筛选技术筛选抗萘单克隆抗体杂交瘤细胞株,捕获ELISA测定小鼠免疫球蛋白亚型。结果显示,实验小鼠免疫血清效价最高能达到1:80000,经过HAT筛选、复检和亚克隆后得到5个能分泌抗萘单克隆抗体的细胞株,细胞株上清液效价最高能达到1:15625,抗萘单克隆抗体免疫球蛋白亚型均为IgG1,Kappa轻链。本方法成功构建的杂交瘤细胞株能稳定高效分泌抗萘单克隆抗体,抗体亚型符合免疫学检测的特性,为萘的ELISA检测方法建立及胶体金免疫层析（GICA）试纸条的研制提供了稳定高效的单克隆抗体源。