杂合抗菌肽LPCB在毕赤酵母中的表达条件优化

为获取能表达具有天然活性的杂合抗菌肽的重组酵母菌,确定其最佳表达条件,将构建好的重组酵母表达载体pPICZα-A-CecropinB(1～10)-Magainin2(1～12)(简称pPICZα-A-CBMA)和pPICZα-A-Lfcin-Pro-CecropinB(简称pPICZα-A-LPCB)经SacⅠ线性化处理,分别电转入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris X-33,利用抗生素Zeocin筛选阳性克隆,PCR扩增验证,甲醇诱导表达.采用抑菌圈法初步测定产物活性,优化杂合肽LPCB诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、培养基pH等表达条件,传代检测其质粒稳定性.结果显示,基因工程菌P.pastoris X-33/pPICZα-A-CBMA和P.pastoris X-33/pPICZα-A-LPCB成功构建.表达产物前者抑菌活性微弱,后者抑菌活性良好.杂合肽LPCB的最佳表达条件为:25℃,pH中性培养,每24 h添加0.5%(V/V,φ)甲醇,诱导表达72 h.重组酵母菌pPICZα-A-LPCB在培养超过100代后,未发生质粒丢失.     

昆虫抗菌肽及其基因工程研究进展

昆虫抗菌肽是一类具有免疫效应的小分子多肽,它具有热稳定、抗菌谱广、无免疫原性、作用机制独特等特性,是昆虫能够抵御自然界中许多有害微生物侵染的重要因素.近年来,随着有关抗菌肽作用机理及功能研究的深入,其在医药领域的应用越来越引起人们的关注.本文就昆虫抗菌肽的分类、生物功能、基因工程研究进展等作一综述.参33     

菲律宾蛤仔Cu、Pb、Zn、Cd及遗传杂合度的相互关系研究

测定了中国北方５个群体（青岛、烟台、兴城、大连、丹东）菲律宾蛤仔体内Ｃｕ、Ｐｂ、Ｚｎ、Ｃｄ含量，研究了４种重金属之间的相互关系及与遗传杂合度的相互关系。结果表明，Ｃｕ和Ｚｎ、Ｃｕ和Ｃｄ、Ｚｎ和Ｃｄ具有显著的相关性；Ｃｕ和Ｚｎ相关系数最大为０．９８３２，线性方程为：Ｃｚｎ＝５．２０７Ｃｃｕ－７．５８１６；Ｃｕ、Ｚｎ、Ｃｄ与杂合度相关系数为正，ｂｐ与杂合度相关系数为负，相关性均不显著。     

蚯蚓抗菌肽EABP-1的分离纯化及部分性质

经硫酸铵沉淀、超滤和阳离子交换分离 ,得到了一蚯蚓抗菌肽EABP 1,该肽的最大紫外吸收在 2 77.16nm ,SDS PAGE结果表明其Mr≈ 2 0× 10 3,精确的分子量没有确定 .最小抑菌浓度 (ρMIC)实验表明 ,EABP 1对鹑鸡肠球菌(Enterococcusgallinarum)、绿脓杆菌 (Pseudomonaspyocyanea)、鲍氏不动 (Acinetobacterbaumanii)、土生克雷伯 (Kleb siellaterrigena)的 ρMIC为 11.4μg/mL ,对粪肠球菌 (Enterococcusfaecalis)的 ρMIC为 2 2 .8μg/mL ,对真菌白色念株菌(Candidaalbicans)没有表现为完全的抑制作用 .图 1表 1参 10     

生物抗菌肽的应用及市场开发前景

抗菌肽广泛分布于生物体内，具有广谱抗菌能力，是天然的免疫防御系统，对病毒及癌细胞也有抑制作用。与传统抗生素作用机理不同，抗菌肽不会产生抗药菌株，是新一代抗生素的理想替代者，具有极好的市场开发前景。     

无指盘臭蛙皮肤抗菌肽的分离纯化与氨基酸序列测定

在抗菌活性跟踪下对四川冕宁产无指盘臭蛙(Odorrana grahami)皮肤分泌物进行一系列层析分离,最终纯化得到4种抗菌肽,分别命名为Odorgrin A、Odorgrin B、Odorgrin C和Odorgrin D.质谱测得单一同位素分子量Mr分别为3364.8、3817.9、4859.4和3287.9.Edman降解法测得OdorgrinA的氨基酸序列为GLLDTFKNLALNAAKSAGVSV-LNSLSCKLSKTC.将以上结果与国内外对该物种抗菌肽研究的已有结果进行了比较分析,证明本研究分离到的4种抗菌肽与前人分离到的部分抗菌肽间具有一致性.     

小皱蝽抗菌物质的诱导及抗菌肽AMP-2的分离纯化和特性

针刺小皱蝽成虫腹部,诱导免疫防御反应,小皱蝽成虫组织经过浸提、浸提液TFA酸化、超速离心、超滤、固相萃取等分离步骤,平板生长抑制试验检测抗菌活性.在C18Sep-Pak固相萃取柱上,40?N洗脱组分为初样品,经RP-HPLC、GPC-HPLC及填料孔径更小的反相色谱柱纯化,得到0.452mgAMP2样品.琼脂孔扩散法检测AMP2抗菌活性,回收率为4.04%.抗菌肽AMP2在SuperdexPeptide凝胶过滤柱上测得分子量(Mr)为3.2×103,茚三酮反应紫色.AMP2具有一定热稳定性,在pH3～8的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,对检测的动植物病原菌具有广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌D22、枯草芽孢杆菌的MIC值为2.5μg/mL,对四联球菌的MIC值为5.0μg/mL,AMP2可能为富含脯氨酸的小分子抗菌肽.图3表2参11     

无指盘臭蛙皮肤抗茵肽的分离纯化与氨基酸序列测定

在抗菌活性跟踪下对四川冕宁产无指盘臭蛙（Odorranagrahami）皮肤分泌物进行一系列层析分离，最终纯化得到4种抗菌肽，分别命名为Odorgrin A、Odorgrin B、OdorgrinC和OdorgrinD．质谱测得单一同位素分子量恤分别为3364．8、3817．9、4859．4和3287．9．Edman降解法测得OdorgrinA的氨基酸序列为GLLDTFKNLALNAAKSAGVSV—LNSLSCKLSKTC．将以上结果与国内外对该物种抗菌肽研究的已有结果进行了比较分析，证明本研究分离到的4种抗菌肽与前人分离到的部分抗菌肽间具有一致性．