岩豆凝集素的纯化及其分子残基的化学修饰和活性关系

岩豆种子经侵取、硫酸铵分级、ＤＥＡＥ－纤维素离子交换和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００分子筛层析，获得ＦＰＬＣ上单一的凝集素样品，对此纯化的凝集素样品用Ｎ－溴代丁二酰亚胺、Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺、二流苏糖醇，碘乙酸和对氯汞苯甲酸修饰其分子内的色氨酸和巯基．经计算，该凝集素分子内含有４个色氨酸和２４个流基，当色氨酸被修饰后其凝集活性全部丧失，而巯基被修饰后对其凝血活性无任何影响，表明巯基与凝集素分子的凝血活性无关，而色氨酸则是凝集活性所必需的基团．     

三种海藻凝集素细胞凝集活性的比较

比较了3种经纯化的海藻凝集素即铁钉菜凝集素（IOL），鹿角沙菜凝集素（HCL0和脆江蓠凝集素（GBL）对红细胞，微藻，细菌，酵母及肿瘤细胞的凝集活性，IOL对供试的动物红细胞均有凝集作用，而HCL和GBL只对部分红细胞产生凝集作用，3种凝集素都不能凝集人的A，O，B型血红细胞。在12种供试的微藻中，有6种单细胞藻类分别被海藻凝集素所凝集，海洋微藻比淡水微藻敏感，盐生杜氏藻均可被3种海藻凝集素所凝集，3种海藻凝集素都能凝集枯草杆菌，但不能凝集胃癌细胞，3种凝集素中，IOL对细胞的凝集作用最好，表3参13     

利用荧光淬灭作用研究川泽泻凝集素微环境与生色基团的空间分布

用不带电荷的极性淬灭剂丙烯酰胺和带电荷的I-离子、Cs 对川泽泻凝集素内源荧光进行淬灭研究,以揭示凝集素与小分子物质相互作用以及凝集素荧光生色基团的分布情况.天然川泽泻(Alisma plantago-aquatica Linn)凝集素在280nm和295nm波长下均显示λmax为328nm的荧光发射光谱,表明凝集素荧光生色基团位于相对疏水的环境中.中性淬灭剂丙烯酰胺对凝集素分子的荧光生色基团Tyr和Trp残基的可接近程度为96.81%,而对阴离子淬灭剂I-离子和阳离子淬灭剂Cs 离子的可接近程度分别为37.17%和21.96%.表明川泽泻凝集素荧光氨基酸残基主要位于分子内部的疏水核心.图3参22     

Purification,characterization and toxicity of a mannose-binding lectin from the seeds of Treculia africana plant

In this study, a mannose-specific, homodimeric lectin from the seeds of Treculia africana was purified, characterized and its adverse effects were investigated in mice. The purification protocol involved anionic exchange chromatography on DEAE-Cellulose followed by gel filtration on Sephadex G-100. The hemagglutinating activity of lectin towards human erythrocytes was sensitive to inhibition by D-mannose. Treatment of the protein with EDTA exerted no inhibitory effect; however, analysis of metal content by atomic absorption spectroscopy revealed the presence of Cu²⁺, Fe³⁺, and Mg²⁺. The results obtained showed that the lectin possesses maximum hemagglutinating activity towards human erythrocytes activity over the pH range 3–7.2 and is relatively thermostable up to 50°C. Periodic acid Schiff's (PAS) reagent staining showed that the protein was non-glycosylated while its amino acid composition analysis revealed that the protein contained 155 residues per subunit. The subunit had a minimal molecular weight of 22,139 Daltons, while the native molecular weight was estimated to be 41,000 Daltons. The lectin was found to be moderately toxic to mice with an LD₅₀ of 47.21 µg g^?1 body weight while, histopathological analysis showed no treatment related effects in any of the organs examined.     

Ri质粒转化烟草的影响因素及豌豆凝集素基因在烟草发根中的表达

对Ri质粒转化烟草的影响因素进行研究，以期获得较为理想的实验系统，用发根农杆菌介导，将豌豆凝集素基因导入烟草，获得转基因的烟草发根，GUS组织化学染色，蛋白免疫原位杂交证明,gus报告基因和豌豆凝集素基因已在转基因烟草发根中得到了转译表达，本结构将为瘤菌能否扩大宿主范围，为研究烟草与豌豆根瘤菌相互作用，结瘤固氮的可能性奠定基础。     

大杯伞凝集素的分离纯化及其性质

大杯伞子实体经生理盐水抽提、硫酸铵分步沉淀、DEAE -Sepharose和SephadexG - 10 0柱层析纯化得到大杯伞凝集素 (Clitocybemaximalectin ,CML) .CML经PAGE显示单一条带 ,SDS -PAGE测得其亚基相对分子质量为4 9× 10 3 ,SephadexG - 10 0凝胶过滤测得相对分子质量为 4 9× 10 3 ,CML不含糖 ,等电点为 4 .82 .该凝集素对小鼠脾脏淋巴细胞、小鼠S180 肉瘤细胞和人的A、B、O和AB型血细胞具有凝集作用 ,对兔红细胞的凝集作用可被半乳糖 (galac tose)所抑制 .氨基酸组成分析表明 ,CML含有 16种氨基酸 ,其中天冬氨酸 (asparticacid)、谷氨酸 (glutamicacid)和亮氨酸 (leucine)含量较高 .CML对热、酸碱具有一定的稳定性 ,经 6 0℃处理 10min ,仍有较高的活性 ,在pH 5～ 8范围内较稳定 ,其凝血活性受Mg2 、Ca2 、Zn2 和Mn2 二价阳离子的影响 .CML对小鼠腹腔注射的半致死量为 2 5 .70mg/kg.图 4表 7参 14     

脆江蓠凝集素的部分性质及细胞凝集作用

脆江蓠藻体的磷酸盐缓冲液浸提液 ,经硫酸铵分级沉淀 ,再经DEAE -Sepharose和SephadexG 10 0层析纯化 ,得到脆江蓠凝集素 (GBL) .经测定该凝集素是一种分子量为 33.1× 10 3 ～ 33.8× 10 3 的糖蛋白 ,分子中含有 11%的中性糖 ,具有很高的耐热性 .GBL的凝血活性可被某些单糖或双糖及卵粘蛋白抑制 ,当浓度为 2 .34 μg/mL时引起兔红细胞凝集 ,浓度为 18.75 μg/mL时凝集绵羊红细胞 ,但对鸡、鸭、鸽子红细胞及人A、O、或B型血细胞没有凝集作用 .GBL能够凝集两种单细胞藻类 ,当浓度为 18.75 μg/mL时能凝集盐生杜氏藻 ,但藻细胞密度减少到 18.3× 10 4 /mL时不能发生凝集作用 ;GBL浓度为 9.37μg/mL时引起蛋白核小球藻凝集 ,但当藻细胞密度减少到 2 8.9× 10 4 /mL也不产生凝集反应 .GBL还能够凝集正常的枯草芽孢杆菌和经过热处理的酿酒酵母细胞 .图 3表 6参 14     

乌毛蕨凝集素的部分性质

乌毛蕨的叶片经PBS抽提和硫酸铵沉淀，得到的粗蛋白经活性碳柱处理后，在分子筛层析柱Sephadex G-100上纯化得到一种凝集素(Blechnum Orientale Lectin，简称BOL)，BOL的比活性比粗提液提高了32倍，活力回收率达75％，在PAGE上显示一条蛋白染色带，而在SDS-PAGE上显示BOL由两个不同的亚基组成，亚基分子量分别为16600和22910．BOL是一种糖蛋白，其中性糖含量为20．06％．其分子中含有Mg和Ca两种金属元素，含量分别为0．08％和0．70％．BOL对温度变化敏感，其凝血活性能被N-乙酰葡萄糖胺所抑制，用滤纸圆片法检测，BOL在测试的8种菌中对大肠杆菌和玉米大斑病菌的生长有抑制作用，图4表5参13     

岩豆凝集素分子中色氨酸残基的化学修饰及其荧光光谱研究

从岩豆（Ｍｉｌｌｅｔｔｉａ ｄｉｅｌｓｉａｎａ Ｈａｒｍｓ ｅｘ Ｄｉｅｌｓ）种妇中分离纯化得到的岩豆凝集素（简称ＭＤＬ）经链霉蛋白酶水解,测得其分子中含有４个色氨酸（Ｔｒｐ）残基。用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）对ＭＤＬ分子中的色氨酸残基进行化学修饰,在无变性剂存在下有３．６个Ｔｒｐ残基被修饰,在变性条件下可修饰３．８个Ｔｒｐ残基。修饰后ＭＤＬ活性均丧失,且甘露糖对ＭＤＬ活性雎有保护作用。表明Ｔｒ