根瘤菌新类群的全细胞蛋白电泳及16S rDNA全序列分析

应用ＳＤＳ全细胞蛋白电泳技术对根瘤菌３个新类群进行聚类分析，并对３个新类群中心菌株的１６Ｓ ｒＤＮＡ全序列（Ｍｒ≈１．５ｋｂ）进行了测定。将所测序列与ＥＭＢＬ／ＢａｎｋＩＴ／ＤＤＢＪ资料库中根瘤菌及相关菌已知种的１６Ｓ ｒＤＮＡ全序列进行聚类比较，得到系统发育树状图，树状图中，菌株ＳＨ２２６２３和ＳＨ１９３１２与山羊豆根瘤菌、葡萄土壤杆菌、根癌土壤杆菌和悬钩子土壤杆菌在同一个分支上，彼此亲缘关系较     

鹤望兰基因组DNA的提取方法

由于鹤望兰组织内含有大量多糖类及多酚类物质，严重干预DNA的抽提，利用常规的SDS法，CTAB法和高盐低pH值法都难以抽提出高质量的鹤望兰基因组DNA，本文报道了在进行若干预处理之后，再用常规的SDS，CTAB，SDS裂解的高盐低pH值法和CTAB裂解的高盐低pH值法提取基因组DNA的改进方法，根据外观，琼脂糖凝胶电泳检测，D260nm/D280nm比值的测定。限制性酶切反应，PCR扩增的结果表明，用改进方法提取的基因组DNA无论在纯度上还是在完整性上都比常规方法要好，其中改进SDS裂解的高盐低pH值法是提取鹤望兰基因组DNAS的最好方法。     

细菌SOD对微生物紫外光辐射损伤的恢复作用

将培养至对数中期的大肠杆菌、钝齿棒杆菌和啤酒酵母等３种微生物的细胞适度稀释液，分别涂布于培养皿上使受紫外光照射，在细胞受辐射后死亡率大于９０％时停止照射，立即加入一定剂量的细菌超氧化物岐化酶（ＳＯＤ），以观察ＳＯＤ对微生物活力的恢复效应．结果表明，ＳＯＤ可使受辐照的细胞存活率显著提高，且量效关系明显，而照前添加ＳＯＤ则无上述效应．检测表明，紫外光照射可引发细菌的超弱发光，且该种超弱发光可因氧气的充入而瞬间增强，鲁米诺也能增强这种超弱发光，加入甘露醇对发光无影响．当紫外光照射后加入ＳＯＤ能使发光强度大为减弱，表明此种超弱发光与的活动有关，并对ＳＯＤ拮抗紫外线杀菌的机理作了讨论．     

发根农杆菌转化青蒿影响因素的研究

对叶盘法转化过程中各种影响因素进行研究．结果表明：发根农杆菌种类、基本培养基和青蒿株系对转化率有明显影响，而培养基ｐＨ在５．２～５．８对转化率没有明显影响；发根农杆菌ＡＴＣＣ１５８３４的转化率最高；基本培养基中ＭＳ效果最好；青蒿株系０２５对发根农杆菌最敏感；处于对数生长期的发根农杆菌（Ｄ６６０ｎｍ＝０．７５）稀释５倍后用来转化效果最好；幼嫩的叶片的转化率比成熟叶片高；向共培养培养基中加入乙酰丁香酮等酚类物质对转化没有促进作用．在最适的转化条件下，发根农杆菌ＡＴＣＣ１５８３４对青蒿株系０２５的转化率可达到１００％．ＰＣＲ检测证明，青蒿发根基因组中含有发根农杆菌Ｒｉ质粒ＴＤＮＡ上的ｒｏｌＣ片段．     

抗砷载体的构建及在氧化亚铁硫杆菌中的表达

利用ＤＮＡ体外重组技术，将抗砷质粒ｐＵＭ３经ＨｉｎｄⅢ酶切后得到的４．３ｋｂ抗砷片段克隆到有广泛寄主的ＩｎｃＱ质粒ｐＪＲＤ２１５的ＨｉｎｄⅢ位点上，构建了一个新的抗砷质粒ｐＳＤＸ３。砷抗性研究表明，在大肠杆菌中，ｐＳＤＸ３的抗砷水平与ｐＵＭ３相近。将ｐＳＤＸ３通过接合的方式引入氧化亚铁硫杆菌Ｔｆ－５９中并得到了表达，与对照相比，含质粒ｐＳＤＸ３的Ｔｆ－５９抗砷水平有了很大的提高。     

酸性降水中甲醛的测定方法及其稳定性研究

本文研究了测定酸雨中游离甲醛和络合甲醛总量的方法，在液相中ＨＣＨＯ与Ｓ（Ⅳ）络合生成ＨＭＳＡ，通过加入Ｉ２丙酮溶液使甲醛游离出，再使用ＮａＳｈ试剂（乙酰丙酮和铵）在６０℃水浴中显色３０ｍｉｎ后在４１５ｎｍ光度测定，甲醛总量的检出率≥９７％。１９９２年夏季用该方法测定北京市雨水，其络合甲醛和游离甲醛各占５０％左右。测定甲醛总量时，雨样的最佳保护剂是ＮａＨＳＯ３。测定游离甲醛时，雨样的最佳保护剂是Ｈｇ     

用简并引物扩增与克隆D.radiodurans超氧化物歧化酶和过氧化 …

依据超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（Ｃａｌ）的保守性氨基酸序列,设计简并引物,自Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ基因组ＤＮＡ扩增并克隆了ＳＯＤ和Ｃａｔ基因片 Ｃａｔ基因片段分别长４５３ｂｐ和６７３ｂｐ,各编码１５１和２２４个氨基酸,氨基酸序列与不同生物来源的ＳＯＤ或Ｃａｔ具有高度同源性。     

用简并引物扩增与克隆D.radiodurans超氧化物歧化酶和过氧化氢酶基因片段

依据超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 和过氧化氢酶（Ｃａｔ） 的保守性氨基酸序列,设计简并引物,自Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ 基因组ＤＮＡ扩增并克隆了ＳＯＤ和Ｃａｔ 基因片段．ＳＯＤ 和Ｃａｔ 基因片段分别长４５３ ｂｐ 和６７３ ｂｐ,各编码１５１和２２４ 个氨基酸,氨基酸序列与不同生物来源的ＳＯＤ或Ｃａｔ 具有高度同源性     

1,3—丁二烯与DNA交联致癌机理的研究：代谢产物与鸟嘌呤反应及与DN …

采用ＡＭ１方法计算了环境致癌物１，２－环氧３，４－丁烯（ＥＢ）和１，２，３，４－二环氧丁烷（ＤＥＢ）与ＤＮＡ鸟嘌呤反应过程速率控制步骤的活化能及ＤＥＢ与ＤＮＡ片段生成烷化交联产物的结构和能量。结果得出：用烷化反应的难易程度难以解释ＤＥＢ的致突性比ＥＢ大１００倍的实验事实；强致突的ＤＥＢ可与鸟嘌呤发生两次烷化反应，生成ＤＮＡ交联产物，交联后的ＤＮＡ结构稳定、变形小；而ＥＢ则不能交联。这可能为两者基因     

小麦waxy蛋白亚基1D-SDS-PAGE分离方法改良

对小麦ｗａｘｙ蛋白的提取技术和电泳后胶片的银染方法进行了改良：将无胚的半粒种子研磨成粉，用洗液浸泡２ｈ代替蒸馏水浸泡过夜，并且去掉了用洗液反复洗涤和离心的程序；电泳后胶后的染色采用快速银染法代替常用的银染法，改良后的单向十二烷基酸钠聚丙烯酰胺胶电泳方法（１Ｄ－ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）具有省时、方便、经济和有效的特点，可适用于大批小麦材料的ｗａｘｙ蛋白亚基的分析，图１参５。     

湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建

采用研磨／冻融和SDV蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法，直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA，所得粗DNA用透析袋法以及Nucleaotrap suspension DNA纯化试剂盒进行了纯化，纯化过的DNA能够满是常用限制性内切酶酶切、细菌16S rDNA通用引物和随机引物进行PCR扩增的要求，将所得纯品DNA经过EcoRI部分酶切之后与酶切并脱磷酸的pSK^ 空载体连接，再以大肠杆菌JM109为宿主细胞初步构建了土壤微生物基因组文库，图6参7     

海洋微藻活体及乙醇固定状态下基因组DNA的微量提取方法

探讨了海洋微藻活体及固定状态下基因组DNA的提取方法,即作者改进的CTAB法.结果表明,CTAB改进法提取的基因组DNA蛋白质、酚、盐和小分子的污染较少,多糖成份也得到了有效去除.用5%乙醇固定样本提取DNA的效果最好,对原生动物抑制效果也较明显;10%以上的乙醇可杀死原生动物,但对DNA的降解率较大;30%以上的乙醇对细菌抑制较明显,但DNA都有较大程度的降解.本法提取的DNA可用于正常的酶切和PCR.用甲醛、甲醇/冰醋酸等其它固定液固定样品,DNA的得率低或者质量和纯度低.图7表1参27     

Modified pretreatment method for total microbial DNA extraction from contaminated river sediment

Extraction of high-quality microbial DNA from contaminated environmental samples is an essential step in microbial ecological study. Based on previously published methods for soil and sediment samples, a modified pretreatment method was developed for extracting microbial DNA from heavily contaminated river sediment samples via selection of optimal pretreatment parameters (i.e., reagent solution, reaction duration, and temperature). The pretreatment procedure involves washing the river sediment sample for three times with a solution containing 0.1 mol·L^-1 ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), 0.1 mol·L^-1 Tris (pH 8.0), 1.5 mol·L^-1 NaCl, 0.1 mol·L^-1 NaH₂PO₄, and Na₂HPO₄ at 65°C with 180 r·min^-1 for 15 min to remove humic materials and heavy metals prior to the employment of standard DNA extraction procedures. We compared the results of standard procedure DNA extraction following pretreatment, without pretreatment, and with using a commercial PowerSoil^TM DNA Isolation Kit. The results indicated that the pretreatment significantly improved the DNA quality based on DNA yield, DNA fragment length, and determination of prokaryotic diversity. Prokaryotic diversity exhibited in the DNA with the pretreatment was also considerably higher than that extracted with the PowerSoil^TM DNA Isolation Kit only. The pretreatment method worked well even with a small amount of sediment sample (0.25 g or even lower). The method provides a novel, simple, cost-effective tool for DNA extraction for microbial community analysis in environmental monitoring and remediation processes.     

西藏米拉山高寒草甸土壤微生物DNA提取及宏基因组Fosmid文库构建

青藏高原土壤中富含特殊的微生物资源,因大多数未能得到培养而无法利用.提取微生物总DNA及构建宏基因组文库的方法是研究未培养微生物的重要方法(免培养法).两藏米拉山高寒草甸土壤中腐植酸、有机质含量非常高,DNA提取非常困难,本研究表明卣接法提取该样品的DNA片段小,杂质含量高,不能满足构建大插入片段文库的要求;结合低速离心和Nycodenz密度梯度离心先分离出微生物细胞的间接法虽然DNA产率降低,但是纯度高,片段长,多样性丰富,更适合于构建大插入片段文库.在间接法提取高质量西藏高寒草甸土壤微生物DNA的基础上,成功构建了一个包含30 624个克隆、库容量超过1 Gb、稳定性好的宏基因组Fosmid文库,为从西藏高原土壤中挖掘和利用新的功能基因研究奠定了基础.图7表3参27     

Amplifying Nuclear and Mitochondrial DNA from African Elephant Ivory: a Tool for Monitoring the Ivory Trade

Abstract:   The ability to extract DNA from ivory provides the basis for genetically tracking the origin of poached ivory and thus has important implications for elephant conservation and management. We describe a method to isolate and amplify both genomic and mitochondrial DNA from African elephant ivory that requires very small amounts of ivory taken from any location on the tusk. We pulverized ivory and isolated DNA with a modified QIAamp kit. Ivory as old as 10 to 20 years, stored at ambient conditions, was amenable to DNA isolation with this method. The isolated DNA was robustly amplified at 16 elephant microsatellite loci and two mitochondrial DNA loci. This method has important applications for the forensic analysis of poached African elephant ivory. It enables determination of where stronger antipoaching efforts are needed and provides the basis for monitoring the extent of the trade as well as the consequences of future international trade decisions.     

荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件，在附加5mg L^-1 ZT的高糖(60g L^-1)高琼脂(10g L^-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生；同时，对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析，建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统，在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟，并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发，为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统．利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究，获得了大量再生植株．图1表7参11     

柱撑蒙脱石吸附与催化降解黄药的特性研究

以黄药水溶液为模拟对象,分别考察了粘土用量、吸附时间以及黄药初始浓度等参数对柱撑蒙脱石吸附黄药的影响,结果表明,改性后蒙脱石的结构变化对改善其吸附能力起到了关键作用,有机柱撑剂不仅改变了复合柱撑粘土中蒙脱石原有的亲水特性,合柱撑蒙脱石具有吸附速度快和吸附容量大的特点,同时改善了层间距中无机柱撑剂的物化特性,使得复并且提高了其催化性能。     

快速提取用于PCR分析的几种蔬菜DNA的方法

利用两种不同的简便方法提取大白菜、大葱和厚皮酣瓜发芽种子的DNA，均能产生具有重现性的RAPD结果这两种方法提取DNA的PCR扩增结果与多次利用苯酚／氯仿提取DNA的结果一致.RNase处理与否对提取DNA的PCR扩增结果没有影响.方法1不用氯仿，但残留蛋白质等容易造成DNA溶解困难；方法2提取的DNA纯度高对于含蛋白质较少的植物器官或组织，可以选用方法1，而对于含蛋白质较多的植物器官或组织，宜选用方法2.两种方法提取的DNA量与用苯酚／氯仿提取DNA的量相似样品之间提取DNA量的多少主要受研磨破碎程度高低所决定.方法1每人每天提取约120个样品，方法2提取约100个样品，比先前的方法快1倍多.所提取的每个样品DNA约能用于100次PCR反应，两种DNA提取方法简便、迅速，为快速进行大量样品的PCR分析提供了条件.     

表面活性剂对柴油在土壤中吸附的影响

通过静态吸附实验,研究土壤对十二烷基苯磺酸钠(LAS)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的吸附行为,探讨表面活性剂对柴油吸附的影响.结果表明,土壤对LAS和CTAB的吸附等温线均为非线性,其吸附能力的大小顺序为:轻壤土>轻粘土>中壤土>砂壤土>重壤土>紧砂土.同一土壤中,CTAB的吸附量大于LAS的吸附量.LAS和CTAB均利于柴油在土壤表面的解吸,且LAS的解吸效果更好.柴油的吸附量随LAS浓度的升高而降低.当CTAB的浓度小于临界胶束浓度CMC时,吸附量随CTAB浓度的升高而升高,当CTAB的浓度等于或大于临界胶束浓度(CMC)时,吸附量随CTAB浓度的升高而降低.     

利用不同植物进行DNA损伤彗星实验的方法比较

为了研究彗星实验在植物DNA损伤检测中的应用,以多种植物材料为对象,进行了植物彗星实验的比较研究.分别分离了蚕豆、菠菜、洋葱、菜豆、大蒜、水稻等植物组织的细胞核,并以彗星实验方法研究了H2O2引起的植物细胞核DNA损伤.电泳后发现H2O2处理组植物细胞核出现明显拖尾,而对照组没有出现拖尾或拖尾较小.研究结果表明彗星实验是一种可以在单细胞水平上研究植物DNA损伤程度的手段,具有灵敏、简单、快速的优点.采用合适的细胞核分离方法,能够将彗星实验应用于多种植物,研究其DNA损伤.蚕豆、菠菜、洋葱、菜豆、大蒜等植物的根尖和叶片都可以应用于植物彗星实验,但在本实验条件下利用水稻组织进行彗星试实验并没有获得明显的彗星图像,能否进行彗星实验可能受植物本身性质或实验条件等多种因素的影响.