用单个特异引物扩增桃ACC氧化酶cDNA及其在大肠杆菌中的表达

用单个特异引物和通用引物ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃受伤叶片ｃＤＮＡ中扩增出１．３ｋｂ左右大小的片段．将该扩增产物克隆并对重组克隆作酶切分析发现至少可分为３类．用桃ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ为探针进行点杂交表明,４,７,９,１０,１１,１２重组质粒能与之杂交,其中７,９,１０,１１,１２号重组质粒酶切图谱与已报导的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ基因基本一致,而４号克隆则不同．ＤＮＡ序列分析和ＰＣＲ鉴定表明,插入片段均由５′端特异引物单个引物扩增出来,对７号重组克隆插入片段ＤＮＡ全序列分析表明,７号重组克隆插入片段全长１１４６ｂｐ,包含了除启始密码子外的全部编码区和１９２ｂｐ的３′端非编码区．通过补上起始密码子ＡＴＧ构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达出３５×１０３的非融合蛋白     

桃ACC合酶基因组DNA（pACSG01）的序列分析及其表达

以桃基因组DNA为模板，用套式PCR技术扩增并克隆了桃ACC合酶基因片段，将其克隆（定名为pACSG01）并进行序列测定，表明该自然全长1320bp，并富含HindⅢ和EcoRⅠ位点，与其它ACC合酶基因结构序列有一定的相似性，内含有两个内含子，编码的氨基酸序列与已克隆桃ACC合酶cDNA推导的氨基酸序列的同源性分别为57．4％和56．8％，pACSG01与我们已克隆的两个桃ACC合酶cDNA基因表达有所不同，RNA点杂交和RT－PCR结合Southern杂交分析表明，该基因在成熟和乙烯处理的果实均不表达，伤处理、LiCl和生长素处理也不能诱导核基因的表达，在衰老花瓣中也不表达，图3参18。     

湖北海棠实生树童区与成年区形态学和细胞学比较研究

通过将湖北海棠（Ｍａｌｕｓｈｕｐｅｈｅｎｓｉｓ）实生树不同发育区接穗嫁接到一年生本砧上,建立一个遗传背景一致、所处发育阶段不同的童期研究实验系统,并采用显微图像形态定量分析系统对湖北海棠实生树童区和成年区及其嫁接植株形态学和细胞学进行比较研究．结果表明,实生树从童区向成年区转变后,其叶片细胞核ＤＮＡ相对含量增加,细胞ＲＮＡ合成增强,细胞核增大,但细胞变小,叶片叶肉组织分化程度提高,叶面积增大,叶片增厚;取实生树童区和成年区枝条嫁接到一年生本砧上,成年区嫁接苗当年就具有开花能力,而童区嫁接苗仍保持童年特征,不具备开花能力,ＰＰ３３３不能诱导童区嫁接苗开花,童区嫁接苗分枝能力较强,叶形与实生树童区和同龄实生苗相似．成年区嫁接植株叶片细胞ＲＮＡ含量依然显著高于童区嫁接植株,尽管叶片细胞核ＤＮＡ含量和细胞核大小仍有增加趋势,但增加幅度显著减少,两者叶片叶肉组织均表现为阳性结构．对实生树童区向成年区转变过程中ＤＮＡ和ＲＮＡ含量变化及其作用进行了讨论