大豆栽培和野生种豆类胰岛素的基因分析

以栽培大豆和野生大豆的基因组ＤＮＡ为材料,利用ＰＣＲ技术扩增并克隆了豆类胰岛素基因,分析了两者的ＤＮＡ序列,结果表明,测定的ＤＮＡ序列分别为８４１ｂｐ和９０３ｂｐ有４个核苷酸差异,在信号肽编码区域内各存在一个内含子,大小分别为３６８和３７０个核苷酸;在ＯＲＦ范围内,与前人报导的ｃＤＮＡ序列分别了１个或２个位点的核苷酸差异,从而导致相应位点的氨基酸发生变化,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交表明,栽培大豆和野生大     

转EPSPS+PAT基因大豆向非转基因大豆的基因漂移研究

基因漂移是转基因作物环境风险的重要内容之一。我国不仅是世界上栽培大豆的种植大国和野生大豆最重要的分布区,而且栽培大豆的种植区域与野生大豆的分布区高度重叠,因此,如果转基因大豆在我国进行商业化种植,必须对其向栽培大豆和野生大豆的基因漂移进行严格的评价和研究。以我国自主研发的转EPSPS+PAT基因大豆S4003.14为材料,在吉林省伊通县大田条件下研究其向5种非转基因栽培大豆和5个野生大豆材料的基因漂移。结果表明,S4003.14与5种非转基因栽培大豆和5个野生大豆材料的花期重叠时间分别为17～27和19～23 d;在隔行种植条件下,S4003.14向5种非转基因栽培大豆和5个野生大豆材料基因漂移的异交率分别为0.16%～0.93%和0.06%～0.19%,且杂交后代育性正常;在S4003.14大豆与非转基因栽培大豆之间的距离超过1 m的条件下,未检测到基因漂移的发生。     

用简并引物扩增与克隆D.radiodurans超氧化物歧化酶和过氧化 …

依据超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（Ｃａｌ）的保守性氨基酸序列,设计简并引物,自Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ基因组ＤＮＡ扩增并克隆了ＳＯＤ和Ｃａｔ基因片 Ｃａｔ基因片段分别长４５３ｂｐ和６７３ｂｐ,各编码１５１和２２４个氨基酸,氨基酸序列与不同生物来源的ＳＯＤ或Ｃａｔ具有高度同源性。     

用简并引物扩增与克隆D.radiodurans超氧化物歧化酶和过氧化氢酶基因片段

依据超氧化物歧化酶（ＳＯＤ） 和过氧化氢酶（Ｃａｔ） 的保守性氨基酸序列,设计简并引物,自Ｄ．ｒａｄｉｏｄｕｒａｎｓ 基因组ＤＮＡ扩增并克隆了ＳＯＤ和Ｃａｔ 基因片段．ＳＯＤ 和Ｃａｔ 基因片段分别长４５３ ｂｐ 和６７３ ｂｐ,各编码１５１和２２４ 个氨基酸,氨基酸序列与不同生物来源的ＳＯＤ或Ｃａｔ 具有高度同源性     

用单个特异引物扩增桃ACC氧化酶cDNA及其在大肠杆菌中的表达

用单个特异引物和通用引物ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃受伤叶片ｃＤＮＡ中扩增出１．３ｋｂ左右大小的片段．将该扩增产物克隆并对重组克隆作酶切分析发现至少可分为３类．用桃ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ为探针进行点杂交表明,４,７,９,１０,１１,１２重组质粒能与之杂交,其中７,９,１０,１１,１２号重组质粒酶切图谱与已报导的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ基因基本一致,而４号克隆则不同．ＤＮＡ序列分析和ＰＣＲ鉴定表明,插入片段均由５′端特异引物单个引物扩增出来,对７号重组克隆插入片段ＤＮＡ全序列分析表明,７号重组克隆插入片段全长１１４６ｂｐ,包含了除启始密码子外的全部编码区和１９２ｂｐ的３′端非编码区．通过补上起始密码子ＡＴＧ构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达出３５×１０３的非融合蛋白     

大鼠类Alu重复序列的克隆及其在染色体DNA突变分析中的应用

从大鼠低Ｃｏｔ值ＤＮＡ文库分离到一种类Ａｌｕ的重复序列，命名为ＲＡＬＲＳ－１。对ＲＡＬＲＳ－１克隆并进行了测序，长度为２８３ｂｐ，发现其中含有单一的微卫星（ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ）序列ＡＧ，ＡＧＧ和ＡＧＧＧ。ＲＡＬＲＳ－１ＤＮＡ序列在大鼠单倍体基因组中的拷贝数为１５００００～３３００００。依ＲＡＬＲＳ－１中的一段序列合成了一２８寡核苷酸探针（ＡＧＧＧ）７，对大鼠正常组织和肿瘤组织ＤＮＡ指数谱     

转基因大豆向野生大豆基因漂移研究进展

随着转基因作物在全球范围内大规模的商业化种植,转基因作物向其野生近缘种基因漂移及其引起的环境风险成为转基因生物安全领域的新课题。野生大豆是我国最重要的生物遗传资源之一。目前,我国不但大量进口转基因大豆,而且具有自主知识产权的转基因大豆已经具备了商业化种植的技术条件,然而转基因大豆向野生大豆基因漂移及其对野生大豆物种资源的影响已成为转基因大豆在我国进行商业化种植必须解决的核心问题。从转基因大豆与野生大豆之间的基因漂移、转基因大豆与野生大豆杂交后代的适合度等方面综述了国内外在转基因大豆向野生大豆基因漂移领域的研究进展,指出了包括转基因大豆与野生大豆杂交后代适合度评价研究方面存在的问题和不足,并提出了转基因大豆向野生大豆基因漂移研究方面的未来发展趋势。     

异源精子激发彭泽鲫雌核发育产生的子一代及亲本RAPD分析

对异精激发彭泽鲫雌核发育产生的子一代及双亲进行ＲＡＰＤ 分析,发现异育彭泽鲫子一代中含有少数与父本相同而与母本相异的特异条带．尖鳍鲤、须鲫激发产生的异育彭泽鲫后代与彭泽鲫母本相似率分别为９４．９６％ 、９４．７０ ％ ;与尖鳍鲤、须鲫父本相似率分别为２３．４６％ 、２１ ．０５％ ．结果表明,从基因水平检验,彭泽鲫已不再是完全的母性遗传,异育彭泽鲫基因组ＤＮＡ中可能带有部分异源父本基因组ＤＮＡ的特性     

马铃薯X病毒山西分离物外壳蛋白基因的克隆和核苷酸序列分析

对GenBank公布的马铃薯X病毒的基因组核苷酸序列和外壳蛋白基因的核苷酸序列进行了同源性比对分析.结果表明,马铃薯X病毒外壳蛋白基因核苷酸序列的同源性要高于基因组全序列的同源性,并且外壳蛋白基因3'端核苷酸序列的同源性又高于5'端.设计一对特异性引物,以马铃薯感病植株的总RNA为模板,经RT-PCR扩增得到了马铃薯X病毒外壳蛋白基因.该基因含714个核苷酸,编码238个氨基酸.核苷酸序列比对结果表明,该基因与Genbank公布的马铃薯X病毒其他分离物的外壳蛋白基因的同源性为80.2%～97.5%,且3'端的同源性要高于5'端.上述结果预示,RNA干扰抗病毒基因工程中,利用马铃薯X病毒外壳蛋白基因的3'端比用5'端是更好的策略.     

中国一年生野生大豆群体的遗传多样性研究

选用来自全国各地的一年生野生大豆２００ 余份材料,从形态性状、等位酶标记和细胞器ＤＮＡＲＦＬＰ标记的遗传丰富度和遗传离散度两方面分析了中国野生大豆群体的遗传多样性．结果表明：中国野生大豆天然群体存在着遗传分化,各地理生态群体间的遗传多样性水平不同,南方群体最高,黄淮海群体次之,东北群体最低．南方为一年生野生大豆的遗传多样性中心,也可能是起源中心．     

快生型大豆根瘤菌(Rhizobium fredii)内源质粒在培养及共生过程中的稳定性

以湖北洪湖公离的快生型大豆根瘤菌为材料，考察了它们的内源质粒在培养过程及共生过程中的稳定性．结果表明，所有供试菌株的质粒在培养条件下比较稳定，传代50次后没有明显变异．对其中2个菌株与4种不同的大豆宿主共生过程中质粒的稳定性研究，发现HA12－1－12的共生质粒和隐性质粒高度构定，HA7－2－2的质粒却发生了不同程度的变异．质粒检测的结果及RFLP分析表明，HA7－2－2共生质粒的稳定性高于隐性质粒，而且共生质粒上携带的nodDABC和nifHDK基因相当保守，不易受宿主的影响而产生变异．盆栽试验的结果也说明，虽然HA7－2－2的内源质粒在共生过程中发生了遗传重排，但它的共生性状没有明显的变异．     

接种孢囊线虫对大豆生长的影响

在温室条件下,研究了不同品种大豆接种大豆孢囊线虫对其根系生长、根瘤及几种矿质元素吸收总量、转移量的影响。结果表明,接种线虫后易感病品种绥农１４根瘤数减少,根瘤活性降低,与不接种处理差异显著;感病品种合丰２５总根长减少２,与不接种处理差异显著。易感病品种绥农１４接种线虫后Ｐ元素的吸收总量降低,与不接种处理差异显著。易感病品种绥农１４接种线虫后Ｐ元素的吸收总量降低,与不接种处理差异显著。感病品种合丰２     

Higher soybean production using honeybee and wild pollinators, a sustainable alternative to pesticides and autopollination

This is the first report showing that using honeybee (Apis mellifera) and wild pollinators complementary pollination can enhance soybean productivity (Glycine max). Current industrial production of soybean involves autopollination and high loads of pesticides. Therefore, growers have neglected possible biotic pollination despite suggestions that soybean benefit from insect pollinators. Reports advocating possible biotic pollination are based on experiments where bees are caged with flowering plants and the absence of pesticides, thus not in field conditions. Therefore, here we compared in field conditions soybean yield produced (1) independently of biotic pollinators, (2) with wild pollinators and (3) with honeybee colonies. Results showed an increase of +6.34 % of soybean yield in areas where wild pollinators had free access to flowers. The introduction of honeybee colonies further raised the yield of +18.09 %. Our findings therefore show that, though soybean is autogamous, allowing pollination by wild pollinators leads to higher yields. Moreover, adding honeybee mitigates pollination deficits and improves yield compared to current practices.     

玉米和黄豆对酸性土壤中石油的去除效果

通过室外盆栽试验,比较了玉米(Zea mays)和黄豆(Glycine max)2种植物对酸性土壤中石油污染物的去除效果。结果表明,2种植物对土壤中石油具有良好的耐受性和去除效果。玉米和黄豆对石油烃的去除率分别可达38.41%～64.30%和34.24%～63.96%,而自然条件下石油去除率仅为23.77%～58.43%。聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)图谱分析结果显示,当w(石油)为0～17 295 mg.kg-1时,土壤微生物群落的丰度和多样性大致随着w(石油)的升高而呈下降趋势,植物根系能够选择性地促进根际微生物的增殖,且玉米根系的作用比黄豆明显。     

慢生型大豆根瘤菌的遗传多样性研究

采用选择性扩增片断长度多态性 (简称AFLP)DNA指纹技术对来自泰国北部的 2 45株慢生型大豆根瘤菌进行遗传多样性的研究 .通过AFLP图谱揭示出该地区的慢生型大豆根瘤菌有较显著的遗传多样性 .从 2 45株中选择出 92个代表株用计算机进行的树状图分析结果表明 ,所分析的菌株在 82 %的相似性水平上聚类成 8个群 .对这 92个代表株的部分菌株和慢生型大豆根瘤菌的参比菌株进行多聚酶链反应 (PCR)扩增的 16SrDNA的 4种限制性内切酶长度多态 (简称 16SrDNAPCR RFLP)分析 ,得出 2个不同的 16SrDNAPCR RFLP类型的菌株 ,分别与慢生型大豆根瘤菌的参比菌株Bradyrhizobiumjaponicum和Bradyrhizobiumelkanii相同 .图 1表 2参 14     

Biodegradation of crude petroleum and petroleum products by fungi isolated from two oil seeds (melon and soybean)

Crude petroleum oil degrading fungi were isolated from two oil seeds, Cucumeropsis mannii (melon) and Glycine max (soybean) seeds in the presence and absence of petroleum fumes. An assessment of the relative ability of each fungus to degrade crude petroleum, diesel and kerosene on minimum salt solution was done using change in optical density read on spectrophotometer. Twenty-one fungal species (14 genera) were isolated altogether during this experiment. These include eight species of Aspergillus; one species each of Botryodiplodia, Bipolaris, Cladosporium, Cunnighamella, Dreschlera, Fusarium, Helminthosporium, Macrophomina, Mucor, Paeciliomyces, Penicillium, Rhizopus and Talariomyces. It was evident that most of the fungi tested were able to biodegrade the crude petroleum oil, though at different rates. Bipolaris had a low rate of biodegradation of the petroleum oil of all the fungal species isolated Botryodiplodia theobromae had the highest degrading ability on the crude oil, while Aspergillus flavus had the least after 40 days of incubation. Aspergillus flavus had the highest ability to biodegrade diesel while A. niger had the least ability. In kerosene, Macrophomina phaseolina had the highest ability while A. niger had the least ability to biodegrade it. There was fluctuation in the growth pattern of the fungi in the petroleum oil medium. The implication of these are discussed.     

环境胁迫和乙烯对番茄PR-NP24基因表达的影响

根据已报道的番茄PR-NP24基因序列设计引物,经PCR克隆出长为477bp的番茄PR-NP24基因片段,以该片段制备探针,采用Northern杂交技术对该基因在番茄(WT)和乙烯反应突变体番茄(Nr,rin,T4B-11)中的表达进行了研究.杂交结果表明,该基因主要在果实和根部表达,伤害抑制WT、Nr番茄叶片中该基因的表达,而对rin番茄叶片无明显影响;干旱、淹水等环境胁迫和乙烯均能不同程度地诱导其表达,而在不同温度下,PR-NP24基因表达变化不大.图7参13     

抗除草剂转基因作物实时荧光定量PC检测

建立了一种以SYBR Green Ⅰ为结合染料、快速准确检测转抗除草剂基因成分的实时荧光定量PCR方法.以转基因大豆与转基因玉米标准品为材料,通过使用特异性引物和SYBR Green Ⅰ结合染料实时荧光定量PCR技术,对转基因农作物中外源抗除草剂基因进行了定量检测,绘制了两种基因扩增的标准曲线图,根据标准曲线方程计算外源基因含量;并作了溶解曲线、检测方法检测灵敏度和精密度的分析.研究发现,两者标准曲线方程线性关系良好.R~2 值分别达到0.993 9与0.992 4.通过已知标准品进行验证,实测值与真值接近,与实际含量的相埘偏差是6.52%和7.90%.结果表明,SYBR Green Ⅰ结合染料法完全可以用于转基因农作物定量PCR检测.图5表2参11     

宁夏地区二斑叶螨的寄主植物选择及其季节转移

采用田间系统观察和室内饲养方法，调查并发现宁夏引黄灌区和新垦区二斑叶螨（Tetranychus urticae Koch)为寄主植物88种，其中野生寄主植物59种，栽培寄主29种，垦前荒漠，半荒漠有适宜二斑叶螨生存和繁殖的寄主植物分布，用生命表方法研究了20种主要寄主植物对二斑叶螨实验种群净生殖率（R0)的营养效应，不同寄主植物随季节的变化其营养效应明显不同，对二斑叶螨在这些寄主植物间的季节转移规律研究表明，宁夏农田，以野荠菜Capsella bursa-pastoris，小旋花Calystegia hederacea,小蓟Cephalanoplos segetumji，苦苣菜Sonchus brachyotus，车前草Plantago asiatica，蚕豆Vicia foba，大豆Glycine max，玉米Zea mays等一起，构成了有利于二斑叶螨季节转移的寄主体系，分析认为，宁夏麦套玉米间作大豆的耕种模式是二斑叶螨大发生的主要原因之一。